紫外可见分光光度法的分析方法及应用

选择合适的溶剂（非极性），使用有足够纯度单色光的分光光度计，在相同条件下测定相近浓度的待测试样和标准品溶液的吸收光谱，然后比较二者吸收光谱特征：吸收峰数目及位置、吸收谷及肩峰所在的位置等。分子结构相同的化合物应有完全相同的吸收光谱，以此可实现有机化合物的定性分析。但是，紫外可见分光光度法不是定性分析的主要工具，只能为红外吸收光谱、核磁共振波谱和质谱等方法进行有机化合物的结构分析提供一些有用的信息。

对于单组分或多组分体系，如果溶液对光的吸收服从Lambert-Beer定律，那么可用紫外可见分光光度法进行定量测定。

1.单组分定量分析方法

（1）标准曲线法 配制一系列（5～10个）不同浓度（c）的标准溶液（见图5-1-3），在适当波长（通常为最大吸收波长）和一定的试验条件下，以适当的空白溶液作参比，分别测定系列溶液的吸光度A，然后绘制标准曲线（A-c曲线）。在相同条件下，测定试样溶液吸光度A_x，从标准曲线上查得对应的样品浓度c_x。

图5-1-3 UV-VIS标准曲线测定法示意图

（2）直接比较法 已知试样溶液的基本组成，可配制基体相同、浓度相近的标准溶液，分别测定其吸光度A_标和A_样，根据Lambert-Beer定律可得

A_标=Kbc_标A_样=Kbc_样

则

2.多组分定量分析(www.xing528.com)

多组分是指在被测溶液中含有两个或两个以上的吸光组分。进行多组分混合物定量分析的依据是吸光度的加和性，即测得溶液的吸光度A=A₁+A₂+A₃+…+A_n。

混合组分的吸收光谱相互重叠的情况不同，测定方法也不相同。常见混合组分吸收光谱相干扰的情况有三种，如图5-1-4所示。

图5-1-4 常见混合组分吸收光谱相干扰的情况

1）如图5-1-4a所示，各种吸光物质的吸收曲线不相互重叠或很少重叠，可分别在λ₁和λ₂处测定组分a和b的吸光度，然后按照单组分的定量方法进行计算。

2）如图5-1-4b所示，吸光物质的吸收曲线部分重叠，组分b对a没有干扰，但是a对b有干扰。a可以按单组分测定的方法在λ₁处测定，然后换算为a的浓度c_a；b的测定，在λ₂处测定溶液的吸光度A₂^a+b及a、b纯物质的摩尔吸光系数，ε₂^a、ε₂^b，则有

A₂^a+b=A₂^a+A₂^b=ε₂^abc_a+ε₂^bbc_b

根据式（5-1-8）即可求得组分b的浓度。

3）如图5-1-4c所示，试样中需测定组分的吸收光谱互相重叠，彼此干扰，但服从Lambert-Beer定律，则根据吸光度的加和性，可不经分离，在n个指定的波长处测量样品混合组分的吸光度，然后联立n个方程，求出各组分含量。例如，对于两种组分的吸收光谱重叠情况，分别在λ₁和λ₂处测定吸光值A^a+b₁和A₂^a+b，同时测定a和b纯物质在λ₁和λ₂处的摩尔吸光系数，则有