如何测定茶叶中的咖啡因？——紫外分光光度法

1.原理

茶叶中的咖啡碱易溶于水，除去干扰物质后，用特定波长测定其含量。

2.仪器与试剂

（1）仪器 分析天平（感量为0.001g）、紫外分光光度仪。

（2）试剂 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

1）碱式乙酸铅溶液：称取50g碱式乙酸铅，加水100mL，静置过夜，倾出上清液过滤。

2）0.01mol/L盐酸：取0.9mL浓盐酸，用水稀释至1L，摇匀。

3）4.5mol/L硫酸：取浓硫酸250mL，用水稀释至1L，摇匀。

4）咖啡碱标准液：称取100mg咖啡碱（纯度不低于99%）溶于100mL水中，作为母液，准确吸取5mL，加水至100mL，作为工作液（1mL含咖啡碱0.05mg）。

3.操作步骤

（1）试样的制备 称取3g（准确至0.001g）磨碎的试样置于500mL锥形瓶中，加沸蒸馏水450mL，立即移入沸水浴中，浸提45min（每隔10min摇动一次）。浸提完毕后立即趁热减压过滤，将滤液移入500mL容量瓶中，残渣用少量热蒸馏水洗涤2次或3次，并将滤液滤入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水稀释至刻度。

用移液管准确吸取上述试液10mL，移入100mL容量瓶中，加入4mL0.01mol/L盐酸和1mL碱式乙酸铅溶液，用水稀释至刻度，混匀，静置，澄清后过滤。准确吸取滤液25mL，注入50mL容量瓶中，加入0.1mL4.5mol/L硫酸溶液，加水稀释至刻度，混匀，静置，澄清后过滤。用10mm比色杯，在波长274nm处以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A）。

（2）测定

1）咖啡碱标准曲线的绘制：分别吸取0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL咖啡碱工作液置于一组25mL容量瓶中，各加入1.0mL盐酸（0.01mol/L），用水稀释至刻度，混匀，用10mm石英比色杯，在波长274nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A）。

2）用测得的吸光度与对应的咖啡碱含量绘制标准曲线。

4.结果计算

茶叶中咖啡碱的含量以干态质量分数表示，按式（3-2-52）计算。

式中 c——根据试样测得的吸光度（A），从咖啡碱标准曲线上查得的咖啡碱相应含量（mg/mL）；

V——试液总量（mL）；

m——试样用量（g）；

w——样品干物质的含量（质量分数）。

如果符合重复性，则取两次测定结果的算术平均值作为结果，保留至小数点后一位。

资料库 食品检验检测方法涉及的项目

1.食品检验项目及内容

1）食品检验检测方法涉及的感官指标有外观、色泽、香气、滋味（口味）、风味、形态（组织形状）、颜色等。

2）食品检验检测方法涉及的理化指标有水分、密度、灰分、蛋白质、脂肪、总糖、还原糖、粗纤维、氨基酸、淀粉、蔗糖、酸度、碱度、酒精度、色度、浊度、维生素等，以及食品添加剂、各类食品的特征性指标。

3）食品检验检测方法涉及的卫生标准理化指标和微生物要求有铅、总砷、无机砷、铜、锌、镉、总汞、有机汞、氟、有机磷农药残留量、黄曲霉毒素、菌落总数、大肠菌群、沙门氏菌、致病菌等。

2.饮料半成品、成品检验项目

饮料半成品、成品检验应严格执行相应的技术标准。产品质量检验项目包括发证检验项目、监督检验项目和出厂检验项目。以下列出的检验项目基于发证的检验要求，表示出厂检验要求的项目和要求企业每年2次检验的项目。由于所有饮料产品检测项目中的食品添加剂均包括苯甲酸、山梨酸、糖精钠、甜蜜素和着色剂，因此下面不再详细列出。

（1）瓶、桶饮用水

1）感官指标：色度、浑浊度、味、肉眼可见物。

2）净含量。

3）理化指标：铜、总砷、镉、铬、余氯、三氯甲烷、耗氧量、挥发性酚、亚硝酸盐。

4）卫生指标：菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、致病菌。

（2）碳酸饮料

1）感官指标。

2）净含量。

3）理化指标：可溶性固形物、二氧化碳气容量、总酸、咖啡因、砷、铅、铜、食品添加剂、钾、钠、钙、镁、抗坏血酸、硫胺素及其衍生物、核黄素及其衍生物。其中，咖啡因为可乐型碳酸饮料检验项目，钾、钠、钙、镁、抗坏血酸、硫胺素及其衍生物、核黄素及其衍生物为充气运动饮料检验项目。

4）卫生指标：菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母数、致病菌。

（3）茶饮料

1）感官指标。

2）净含量。

3）理化指标：茶多酚、咖啡因、食品添加剂、pH值、二氧化碳气容量、总酸、蛋白质、铅、铜、砷。

4）卫生指标：菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、致病菌、商业无菌。商业无菌为除碳酸型茶饮料和奶味茶饮料外，三片金属罐包装其他茶饮料的卫生指标检验项目；菌落总数、大肠菌群、致病菌、霉菌、酵母菌为碳酸型茶饮料、奶味茶饮料和非三片金属罐包装其他茶饮料的卫生指标检验项目；总酸、二氧化碳气容量为碳酸型茶饮料检验项目；蛋白质为奶味茶饮料检验项目；pH值为除碳酸型茶饮料之外其他茶饮料的检验项目。

（4）果（蔬）汁及果（蔬）汁饮料

1）感官指标。

2）净含量。

3）理化指标：总酸，可溶性固形物，原果汁，铜，砷，铅，食品添加剂，二氧化硫残留量（苯甲酸、山梨酸、糖精钠、甜蜜素、着色剂），铁，锌，锡，铁、锌、锡含量总和，展青霉素。

4）卫生指标：菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、致病菌、商业无菌。原果汁为橙、柑、桔汁及其饮料的测定项目；展青霉素为苹果汁和山楂汁的测定项目；铁，锌，锡和铁、锌、锡含量总和为金属罐装产品要求的检验项目。

（5）含乳饮料及植物蛋白饮料

1）含乳饮料

①感官指标。

②净含量。

③理化指标：蛋白质、可溶性固形物、脂肪、酸度、食品添加剂、铅、铜、砷。

④卫生指标：菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、致病菌、乳酸菌。乳酸菌为活性乳酸菌饮料检验项目，菌落总数为非活性乳酸菌饮料检验项目。

2）植物蛋白饮料

①感官指标。(www.xing528.com)

②净含量。

③理化指标：蛋白质、氰化物、尿酶试验、食品添加剂、铅、铜、砷。

④卫生指标：包括菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、致病菌、乳酸菌、商业无菌。氰化物、尿酶试验分别为以杏仁为原料的产品和以大豆为原料的产品的检验项目；商业无菌为三片罐装产品的检验项目；菌落总数、大肠菌群、致病菌、霉菌、酵母菌为其他包装产品的检验项目。

（6）固体饮料

1）感官指标。

2）净含量。

3）理化指标：水分、蛋白质、咖啡因、食品添加剂、铅、铜、砷。

4）卫生指标：菌落总数、大肠菌群、霉菌、致病菌。蛋白质、咖啡因分别为蛋白型固体饮料和焙烤型固体饮料的检验项目。

式中 c——根据试样测得的吸光度（A），从咖啡碱标准曲线上查得的咖啡碱相应含量（mg/mL）；

V——试液总量（mL）；

m——试样用量（g）；

w——样品干物质的含量（质量分数）。

如果符合重复性，则取两次测定结果的算术平均值作为结果，保留至小数点后一位。

资料库 食品检验检测方法涉及的项目

1.食品检验项目及内容

1）食品检验检测方法涉及的感官指标有外观、色泽、香气、滋味（口味）、风味、形态（组织形状）、颜色等。

2）食品检验检测方法涉及的理化指标有水分、密度、灰分、蛋白质、脂肪、总糖、还原糖、粗纤维、氨基酸、淀粉、蔗糖、酸度、碱度、酒精度、色度、浊度、维生素等，以及食品添加剂、各类食品的特征性指标。

3）食品检验检测方法涉及的卫生标准理化指标和微生物要求有铅、总砷、无机砷、铜、锌、镉、总汞、有机汞、氟、有机磷农药残留量、黄曲霉毒素、菌落总数、大肠菌群、沙门氏菌、致病菌等。

2.饮料半成品、成品检验项目

饮料半成品、成品检验应严格执行相应的技术标准。产品质量检验项目包括发证检验项目、监督检验项目和出厂检验项目。以下列出的检验项目基于发证的检验要求，表示出厂检验要求的项目和要求企业每年2次检验的项目。由于所有饮料产品检测项目中的食品添加剂均包括苯甲酸、山梨酸、糖精钠、甜蜜素和着色剂，因此下面不再详细列出。

（1）瓶、桶饮用水

1）感官指标：色度、浑浊度、味、肉眼可见物。

2）净含量。

3）理化指标：铜、总砷、镉、铬、余氯、三氯甲烷、耗氧量、挥发性酚、亚硝酸盐。

4）卫生指标：菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、致病菌。

（2）碳酸饮料

1）感官指标。

2）净含量。

3）理化指标：可溶性固形物、二氧化碳气容量、总酸、咖啡因、砷、铅、铜、食品添加剂、钾、钠、钙、镁、抗坏血酸、硫胺素及其衍生物、核黄素及其衍生物。其中，咖啡因为可乐型碳酸饮料检验项目，钾、钠、钙、镁、抗坏血酸、硫胺素及其衍生物、核黄素及其衍生物为充气运动饮料检验项目。

4）卫生指标：菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母数、致病菌。

（3）茶饮料

1）感官指标。

2）净含量。

3）理化指标：茶多酚、咖啡因、食品添加剂、pH值、二氧化碳气容量、总酸、蛋白质、铅、铜、砷。

4）卫生指标：菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、致病菌、商业无菌。商业无菌为除碳酸型茶饮料和奶味茶饮料外，三片金属罐包装其他茶饮料的卫生指标检验项目；菌落总数、大肠菌群、致病菌、霉菌、酵母菌为碳酸型茶饮料、奶味茶饮料和非三片金属罐包装其他茶饮料的卫生指标检验项目；总酸、二氧化碳气容量为碳酸型茶饮料检验项目；蛋白质为奶味茶饮料检验项目；pH值为除碳酸型茶饮料之外其他茶饮料的检验项目。

（4）果（蔬）汁及果（蔬）汁饮料

1）感官指标。

2）净含量。

3）理化指标：总酸，可溶性固形物，原果汁，铜，砷，铅，食品添加剂，二氧化硫残留量（苯甲酸、山梨酸、糖精钠、甜蜜素、着色剂），铁，锌，锡，铁、锌、锡含量总和，展青霉素。

4）卫生指标：菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、致病菌、商业无菌。原果汁为橙、柑、桔汁及其饮料的测定项目；展青霉素为苹果汁和山楂汁的测定项目；铁，锌，锡和铁、锌、锡含量总和为金属罐装产品要求的检验项目。

（5）含乳饮料及植物蛋白饮料

1）含乳饮料

①感官指标。

②净含量。

③理化指标：蛋白质、可溶性固形物、脂肪、酸度、食品添加剂、铅、铜、砷。

④卫生指标：菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、致病菌、乳酸菌。乳酸菌为活性乳酸菌饮料检验项目，菌落总数为非活性乳酸菌饮料检验项目。

2）植物蛋白饮料

①感官指标。

②净含量。

③理化指标：蛋白质、氰化物、尿酶试验、食品添加剂、铅、铜、砷。

④卫生指标：包括菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、致病菌、乳酸菌、商业无菌。氰化物、尿酶试验分别为以杏仁为原料的产品和以大豆为原料的产品的检验项目；商业无菌为三片罐装产品的检验项目；菌落总数、大肠菌群、致病菌、霉菌、酵母菌为其他包装产品的检验项目。

（6）固体饮料

1）感官指标。

2）净含量。

3）理化指标：水分、蛋白质、咖啡因、食品添加剂、铅、铜、砷。

4）卫生指标：菌落总数、大肠菌群、霉菌、致病菌。蛋白质、咖啡因分别为蛋白型固体饮料和焙烤型固体饮料的检验项目。