1.细菌的简单染色步骤
（1）涂片。取干净的载玻片于实验台上，在正面边角作个记号并滴一滴无菌蒸馏水于载玻片的中央，将接种环在火焰上烧红，待冷却后从斜面挑取少量菌种（大肠杆菌或枯草杆菌）与玻片上的水滴混匀后，在载玻片上涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。（注：活性污泥染色是用滴管取一滴活性污泥于载玻片上铺成一薄层即可）。牙签取牙缝间的牙垢制涂片，观察其中的螺旋菌。
（2）干燥。在室温下自然干燥，为了加速干燥，可在酒精灯火焰上方烘干。但不宜在高温下长时间烤干，否则急速失水会使菌体变形。
（3）固定。手持载玻片一端，将已干燥的涂片正面向上，在微小的火焰上快速通过2～3次，要求载玻片背面不烫为宜。
固定的目的是加热使细菌的蛋白质凝固而固着在载玻片上；一般死细胞的原生质比活菌体通透性好，容易着色。
（4）染色。在载玻片上滴加染色液（石炭酸复红、草酸铵结晶紫或美蓝任选一种），使染液铺盖涂有细菌的部位作用约1min。
（5）水洗。斜置载玻片，倾去染液，在自来水龙头下用小股水流冲洗多余染料，直至水呈无色为止。
（6）干燥。用吸水纸吸去涂片边缘的水珠（注意勿将细菌擦掉），然后放置于桌子上风干。
（7）镜检。用显微镜观察，并用铅笔绘出细菌形态图。
2.细菌的革兰氏染色步骤(www.xing528.com)
（1）制片。取大肠杆菌（均以无菌操作）分别做涂片（见图9.4）、干燥、固定。
图9.4 无菌操作及做涂片的过程
（2）初染。用草酸铵结晶紫染液染1min，水洗。
（3）媒染。加路哥氏碘液冲去草酸铵结晶紫染液并媒染1min，水洗。
（4）脱色。斜置载玻片，滴加95%乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色即可，随即水洗。
（5）复染。用蕃红染液复染2min，水洗。染色结果见图9.5。
（6）镜检。用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后用油镜观察，注意细菌细胞的颜色。绘出细菌的形态图并说明革兰氏染色的结果。
染色关键：必须严格掌握乙醇脱色程度，如果脱色过度，阳性菌被误染为阴性菌；若脱色不够时，阴性菌被误染为阳性菌。
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