一、任务介绍
在模拟仿真生产环境下完成发酵产物检测工作。要求：学会谷氨酸的定量测定方法。
二、任务分析
谷氨酸和茚三酮在弱酸条件下共热反应可以生成蓝紫色物质，其颜色的深浅主要与谷氨酸的浓度有关，产生的颜色深浅与游离α-氨基氮含量成正比，在波长570nm下有最大吸收值，可用比色法测定。
三、相关知识点
谷氨酸的定量测定：通过测定发酵液中的游离氨基酸的氨基氮来得到，或用SBA-40测定仪。氨基酸定量测定用茚三酮比色法。
四、任务材料
1.仪器 可见光分光光度计，具塞试管，直径16mm，长150mm，沸腾水浴，20℃水浴。
2.试剂
缓冲溶液的制备：配制pH6.0NaAc-HAc缓冲溶液。取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml，即得。
谷氨酸标准液的配制：用天平准确称取1.000 0g谷氨酸标准品，溶于1L缓冲溶液中。
标准溶液：用天平准确称取1.000 0g谷氨酸标准品→溶于缓冲溶液中定容至1L→摇匀→吸1ml于另外100ml容量瓶，用缓冲溶液定容100ml，即得1000ug/ml标液。在0℃贮藏。再采用逐级稀释法，配得浓度为80μg/ml、90μg/ml至140μg/ml的谷氨酸标准液。(www.xing528.com)
茚三酮试剂的制备：称取0.5g茚三酮溶于100ml水中得到5g/L的茚三酮水溶液。
五、任务实施
1.制备标准曲线 对谷氨酸标准液进行稀释，制备80～140μg/ml的谷氨酸稀释液。分别吸取80～140μg/ml的谷氨酸标准液4ml于25ml的比色管中，各加入1ml的茚三酮试剂（表4-1），加上塞充分摇匀。将其置于90℃下水浴20～25分钟，20℃水浴冷却至室温，用752型分光光度计在570nm下测得其光密度值。以标准液的光密度值和浓度做一标准曲线。
表4-1 谷氨酸标准曲线的制备
2.样品的测定 稀释待测液于80～140μg/ml内（谷氨酸发酵液浓度一般在8%～14%，测量时稀释1000倍即可），调pH为6.0（NaAc-HAc缓冲溶液调pH）（表4-2）。以同样的反应量与反应条件进行反应，并在570nm下测定其光密度值。
表4-2 发酵液中谷氨酸含量的测定
3.根据标准曲线，计算样品中氨基酸的含量 由以上所得标准曲线对应查得待测稀释液的浓度，再乘以稀释倍数，即为谷氨酸待测液的浓度。
六、任务总结
操作要点和注意事项。
七、任务拓展
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