血清学试验助您诊断羊病

31.羊病诊断中常用的血清学试验方法有几种？

细菌、病毒等病原体感染动物后可刺激机体产生相应的抗体，故一般可用血清学试验的方法来进行传染病的诊断。

血清学实验技术有凝集反应、沉淀反应、补体结合反应、中和反应、标记抗体技术等多种。常用的有凝集试验（如羊布氏杆菌病平板凝集试验）、沉淀试验（如羊布氏杆菌病全乳环状沉淀试验、羊关节炎-脑炎病毒琼脂扩散试验）、免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验等。

（1）凝集试验　细菌、红细胞等颗粒性抗原的悬液与相应的抗体结合后，在电解质的参与下，抗原抗体相互凝集形成团块，这种现象叫做凝集试验或称凝集反应。凝集反应有平板法和试管法两种。

平板凝集法是在洁净的玻璃板上进行的，以适当稀释的抗血清（或待检血清）与抗原悬液各1滴在玻板上混合，轻轻摇动玻板，阳性者数分钟后出现团块状或絮片状凝集。此法简易快速，通常用于作未知细菌的鉴定或监测某些病原体感染的群体检疫，如沙门杆菌、布氏杆菌病的检疫等。

试管法通常用已知的抗原（细菌悬液）检测待检血清中的抗体效价（凝集价），试验可在小试管或有孔塑料板上进行。先将血清用生理盐水做2倍递增稀释，通常为1∶5～1∶1280，一管不加血清，作为对照。每管0.5毫升。各管加入等量的抗原悬液，振荡混合，置37℃水浴（或温箱）4小时，取出室温放置过夜，观察结果。

注意：一般细菌凝集呈颗粒状，有动力的细菌如在抗原制备时鞭毛未被破坏，则反应时往往出现鞭毛凝集，即呈现絮状凝块；有些病毒能凝集某种动物的红血球，利用病毒的血凝性，凝集试验也可用于病毒病的诊断。(www.xing528.com)

（2）琼脂扩散试验　该试验是指抗原与抗体在琼脂凝胶内扩散，在电解质的参与下，抗原抗体复合物形成肉眼可见的沉淀线。本试验操作简便，不需特殊设备，且特异性强、检出率高，已在兽医临床上广泛应用。

①试验材料。琼脂糖、平皿、8%氯化钠溶液、pH7.0的0.01摩尔/升磷酸盐缓冲液、1%硫柳汞、打孔器、酒精灯、注射器、5号注射针头、标准抗原和阳性血清（均由兽医生物制品厂或研究单位提供）、被检血清（未污染和腐败血液析出的血清）。

②琼脂板的制备。用含8%氯化钠溶液和pH7.0的0.01摩尔/升磷酸盐缓冲液配制1%的琼脂糖，加热溶化后，加1%硫柳汞适量，使硫柳汞含量为0.01%。待琼脂糖冷至50℃左右时倾倒入平皿，使厚度为2.5～3毫米，注意不要产生气泡。制好的琼脂板置4℃冰箱中保存（可保存2周）备用。

③打孔。打孔器为薄壁金属管，直径为3～4毫米。先设计出图案，中间1孔，直径为4毫米，周围6孔，孔径为3毫米，孔间距3毫米。将图案置于凝固后的琼脂板下，照图案打孔，用注射针头挑出孔中的琼脂，将琼脂板底放酒精灯上微热，使孔底琼脂微熔，封住孔底。

④加样。用毛细滴管，或装5号针头的注射器，或微量移液器加样。中间孔加已知的抗原，周围孔分别加标准阳性血清、阴性血清或被检血清，均加至孔满为止。置37℃恒温箱中，分别于24小时、48小时、72小时观察记录反应结果。

⑤结果判定。当标准阳性血清与抗原孔之间出现明显的、致密的沉淀线，且阴性对照无沉淀线时，若被检血清与抗原之间有沉淀线，则判为阳性；若被检血清与抗原之间无沉淀线，则判为阴性。