烟草及烟草制品中水溶性糖的测定方法——连续流动法

1 范围

本标准规定了烟草中水溶性糖的测定方法。

本标准适用于烟草和烟草制品。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 5606.1 卷烟 抽样

YC/T 5 烟叶成批取样的一般原则

YC/T 31 烟草及烟草制品 试样的制备和水分测定 烘箱法

3 原理

用5%乙酸水溶液萃取烟草样品，萃取液中的糖（水溶性总糖测定时应水解）与对羟基苯甲酸酰肼反应，在85℃的碱性介质中产生一黄色的偶氮化合物，其最大吸收波长为410nm，用比色计测定。

注：如果用水萃取，某些样品中的蔗糖会水解。

4 试剂

使用分析纯级试剂，水应为蒸馏水或同等纯度的水。

4.1 Brij-35溶液（聚乙氧基月桂醚）

将250g Brij-35加入到1 L水中，加热搅拌直至溶解。

4.2 0.5mol/L氢氧化钠溶液

将20 g片状氢氧化钠加入到800mL水中，搅拌，放置冷却。溶解后加入0.5mL Brij-35 （4.1），用水稀释至1 L。

4.3 0.008mol/L溶液

将1.75g氯化钙（CaCl₂·6H₂O）溶于水中，加入0.5mL Brij-35（4.1），用水稀释至1L。

注：若溶液中有沉淀，应用定性滤纸过滤。

4.4 5%乙酸溶液

用冰乙酸制备5%乙酸溶液（此溶液用于制备标准溶液、萃取溶液）。

4.5 活化5%乙酸溶液

取1 L 5%乙酸溶液（4.4），加入0.5mL Brij-35溶液（4.1）（此溶液用于冲洗系统）。

4.6 0.5mol/L盐酸溶液

在通风橱中，将42mL发烟盐酸（质量分数为37%）缓慢加入到500mL水中，用水稀释至1L。

4.71.0mol/L盐酸溶液

在通风橱中，将84mL发烟盐酸（质量分数为37%）缓慢加入到500mL水中，加入0.5mL Brij-35溶液（4.1），用水稀释至1 L。

4.8 1.0mol/L氢氧化钠溶液

用500mL水溶解40g片状氢氧化钠，用水稀释至1 L。

4.9 5%对羟基苯甲酸酰肼溶液

将250mL 0.5mol/L盐酸溶液（4.6）加入到500mL容量瓶中，加入25g对羟基苯甲酸酰肼，使其溶解。加入10.5g柠檬酸 [HOC（CH₂ COOH）₂ COOH·H₂O]，溶解后用0.5mol/L盐酸溶液稀释至刻度。于5℃储存，使用时只取需要量。

注：对羟基苯甲酸酰肼（质量分数大于97%）的纯度非常重要。如果有杂质，将会在管路中形成沉淀。可以用水重结晶进行纯化，如有下列情形则表明对羟基苯甲酸酰肼不纯：

——白色的对羟基苯甲酸酰肼结晶中有黑色颗粒；

——5%对羟基苯甲酸酰肼溶液呈黄色；

——对羟基苯甲酸酰肼在0.5mol/L氢氧化钠溶液中溶解困难；(www.xing528.com)

——溶液中有悬浮颗粒；

——基线呈波浪形。

5%对羟基苯甲酸酰肼溶液也可用下述方法进行制备：向烧杯中加入250mL 0.5mol/L盐酸溶液，加热至45℃，持续搅拌下加入对羟基苯甲酸酰肼和柠檬酸，冷却后转入容量瓶中，用盐酸溶液稀释至刻度。用这种方法制备的对羟基苯甲酸酰肼溶液可避免在管路中形成沉淀。

4.10 D-葡萄糖

4.11 标准溶液

4.11.1 储备液：称取10.0g D-葡萄糖（4.10）于烧杯中，精确至0.0001 g，用5%乙酸溶液（4.4）溶解后转入1 L容量瓶中，用5%乙酸溶液定容至刻度。储存于冰箱中。此溶液应每月制备一次。

4.11.2 工作标准液：由储备液用5%乙酸溶液制备至少5个工作标准液，其浓度范围应覆盖预计检测到的样品含量。工作标准液应储存于冰箱中，每两周配制一次。

5 仪器设备

常用实验仪器如下所示。

5.1 连续流动分析仪（见图1），由下述各部分组成：

取样器；比例泵；渗析器；加热槽；螺旋管；比色计，配410nm滤光片；记录仪。

5.2 分析天平，感量0.0001g。

5.3 振荡器。

6 分析步骤

6.1 抽样

按照GB/T 5606.1或YC/T 5抽取样品。

6.2 按照YC/T 31制备试样，测定水分含量。

6.3 称取0.25g试料于50mL磨口三角瓶中，精确至0.0001g，加入25mL 5%乙酸溶液，盖上塞子，在振荡器上振荡萃取30min。

6.4 用定性滤纸过滤，弃去前几毫升滤液，收集后续滤液作分析之用。

6.5 上机运行工作标准液和样品液。如样品液浓度超出工作标准液的浓度范围，则应稀释。

7 结果的计算与表述

7.1 水溶性糖的计算

以干基试样计的水溶性糖的含量，以葡萄糖计，由式（1）得出：

式中 c——样品液总（还原）糖的仪器观测值，mg/mL；

V——萃取液的体积，mL；

m——试料的质量，mg；

W——试样水分的质量分数，%。

图1 水溶性糖测定管路图

注：测定总糖时，红/红¹为1.0mol/L盐酸，95℃加热槽打开；测定还原糖时，红/红¹管为活化水，红/红²管为水，95℃加热槽关闭。

7.2 结果的表述

以两次测定的平均值作为测定结果。

若测得的水溶性糖含量大于或等于10.0%，结果精确至0.1%；若小于10.0%，结果精确至0.01%。

8 精密度

两次平行测定结果绝对值之差不应大于0.50%。