测定糖精钠的定性和定量方法及标准储备溶液制备

糖精钠的定性鉴别：间苯二酚法检验、火焰法、熔点测定法。糖精钠的定量测定主要有高效液相法、薄层色谱法、离子选择电极测定法等。

1.高效液相色谱法

试样加温除去二氧化碳和乙醇，调节pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。高效液相色谱法取样量为10g，进样量为10μL时检出量为1.5ng。

（1）试剂和仪器。

甲醇：经0.5μm滤膜过滤。

氨水（1+1）：氨水加等体积水混合。

乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL溶解，经0.45μm滤膜过滤。

糖精钠标准储备溶液：准确称取0.0851g经120℃烘干4h后的糖精钠（C6H4CONNaSO2·2H2O），加水溶解定容至100mL。糖精钠含量1.0mg/mL，作为储备溶液。

糖精钠标准使用溶液：吸取糖精钠标准储备液10mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度，经0.45μm滤膜过滤，该溶液每毫升相当于0.10mg的糖精钠。

高效液相色谱仪（附紫外检测器）。

（2）试样处理。

汽水：称取5.00～10.00g放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水（1+1）调节pH至7左右。加水定容至适当的体积，经0.45μm滤膜过滤。

果汁类：称取5.00～10.00g，用氨水（1+1）调pH约7，加水定容至适当的体积，离心沉淀，上清液经0.45μm滤膜过滤。

配制酒类：称取10.00g，放小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水（1+1）调pH至7左右，加水定容至20mL，经0.45μm滤膜过滤。

高效液相色谱参考条件：YWG-C18柱，4.6mm×250mm 10μm不锈钢柱。甲醇：乙酸铵溶液（0.02mol/L）（5+95）流动相，流速1mL/min。紫外检测器230nm波长，0.2AUFS。

测定取处理液和标准使用液各10μL（或相同体积）注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间为依据进行定性，以其峰面积求出样液中被测物质的含量，供计算。试样中糖精钠含量按下式进行计算。

式中：X——试样中糖精钠含量，g/kg；

A——进样体积中糖精钠的质量，mg；

V2——进样体积，mL；

V1——试样稀释液总体积，mL；

m——试样质量，g。

计算结果保留三位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。在该分离条件可以同时测定苯甲酸、山梨酸和糖精钠，其分离色谱图见图5-2。

图5-2分离色谱图

2.薄层色谱法

在酸性条件下，食品中的糖精钠用乙醚提取、浓缩、薄层色谱分离、显色后与标准比较，进行定性和半定量测定。

（1）试剂。

乙醚：不含过氧化物。

无水硫酸钠。

无水乙醇及乙醇（95%）。

聚酰胺粉：200目。

盐酸（1+1）：取100mL盐酸，加水稀释至200mL。

展开剂：正丁醇+氨水+无水乙醇（7+1+2）。异丙醇+氨水+无水乙醇（7+1+2）。

显色剂：溴甲酚紫溶液（0.4g/L）：称取0.04g溴甲酚紫，用乙醇（50%）溶解，加氢氧化钠溶液（4g/L）1.1mL调节pH为8，定容至100mL。

硫酸铜溶液（100g/L）：称取10g硫酸铜（CuSO4·5H2O），用水溶解并稀释至100mL。

氢氧化钠溶液（40g/L）。

糖精钠标准溶液：准确称取0.0851g经120℃干燥4h后的糖精钠，加乙醇溶解，移入100mL容量瓶中，加乙醇（95%）稀释至刻度，此溶液每毫升相当于1mg糖精钠（C6H4CONNaSO2·2H2O）。

（2）仪器。

玻璃纸：生物制品透析袋或不含增白剂的市售玻璃纸。

玻璃喷雾器。

微量注射器。

紫外光灯：波长253.7nm。

薄层板：10cm×20cm或20cm×20cm。

展开槽。

（3）试样提取：

饮料、冰棍、汽水：取10.0mL均匀试样（如试样中含有二氧化碳，先加热除去。如试样中含有酒精，加4%氢氧化钠溶液使其呈碱性，在沸水浴中加热除去），置于100mL分液漏斗中，加2mL盐酸（1+1），用30mL、20mL、20mL乙醚提取三次，合并乙醚提取液，用5mL盐酸酸化的水洗涤一次，弃去水层。乙醚层通过无水硫酸钠脱水后，挥发乙醚，加入2.0mL乙醇溶解残留物，密塞保存，备用。

酱油、果汁、果酱等：称取20.0g或吸取20.0mL均匀试样，置于100mL容量瓶中，加水至约60mL，加20mL硫酸铜溶液（100g/L），混匀，再加4.4mL氢氧化钠溶液（40g/L），加水至刻度，混匀，静置30min，过滤，取50mL滤液置于150mL分液漏斗中，以下操作同上。

固体果汁粉等：称取20.0g磨碎的均匀试样，置于200mL容量瓶中，加100mL水，加温使溶解、放冷，以下操作同上。

糕点、饼干等蛋白、脂肪、淀粉多的食品：称取25.0g均匀试样，置于透析用的玻璃纸中，放入大小适当的烧杯内，加50mL氢氧化钠溶液（0.8g/L）。调成糊状，将玻璃纸口扎紧，放入盛有200mL氢氧化钠溶液（0.8g/L）的烧杯中，盖上表面皿，透析过夜。

量取125mL透析液（相当于12.5g试样），加约0.4mL盐酸（1+1）使呈中性，加20mL硫酸铜溶液（100g/L），混匀，再加4.4mL氢氧化钠溶液（40g/L），混匀，静置30min，过滤。取120mL（相当于10g试样），置于250mL分液漏斗中，以下操作同上。(www.xing528.com)

（4）薄层板的制备与点样。

称取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加约7.0mL水，研磨3～5min，立即涂成0.25～0.30mm厚的10cmg×20cmg的薄层板，室温干燥后，在80℃下干燥1h。置于干燥器中保存。

在薄层板下端2cmg处，用微量注射器点10μL和20μL的样液两个点，同时点3.0μL、5.0μL、7.0μL、10.0μL糖精钠标准溶液，各点间距1.5cmg。

（5）展开与显色。

将点好的薄层板放入盛有展开剂的展开槽中，展开剂液层约0.5cmg，并预先已达到饱和状态。展开至10cmg，取出薄层板，挥干，喷显色剂，斑点显黄色，根据试样点和标准点的比移值进行定性，根据斑点颜色深浅进行半定量测定。

试样中糖精钠的含量按下式进行计算。

式中：X——试样中糖精钠的含量，g/kg或g/L；

A——测定用样液中糖精钠的质量，mg；

m——试样质量或体积，g或mL；

V1——试样提取液残留物加入乙醇的体积，mL；

V2——点板液体积，mL。

3.离子选择电极测定方法

糖精选择电极是以季铵盐所制PVC薄膜为感应膜的电极，它和作为参比电极的饱和甘汞电极配合使用以测定食品中糖精钠的含量。当测定温度、溶液总离子强度和溶液接界电位条件一致时，测得的电位遵守能斯特方程式，电位差随溶液中糖精离子的活度（或浓度）改变而变化。

被测溶液中糖精钠含量为0.02～1mg/mL。电极值与糖精离子浓度的负对数呈直线关系。

（1）试剂。

乙醚：使用前用盐酸（6mol/L）饱和。

无水硫酸钠。

盐酸（6mol/L）：取100mL盐酸，加水稀释至200mL，使用前以乙醚饱和。

氢氧化钠溶液（0.06mol/L）：取2.4g氢氧化钠溶解并稀释至1000mL。

硫酸铜溶液（100g/L）：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O）10g溶于100mL水中。

氢氧化钠溶液（40g/L）。

氢氧化钠溶液（0.02mol/L）：将氢氧化钠溶液（0.06mol/L）稀释而成。

磷酸二氢钠［c（NaH2PO4·2H2O）=1mol/L］溶液：取78g NaH2PO4·2H2O溶解后转入500mL容量瓶中溶解后，加水稀释至刻度，摇匀。

磷酸氢二钠［c（Na2HPO4·12H2O）=1mol/L］溶液：取89.5g Na2HPO4·12H2O于250mL容量瓶中溶解后，加水稀释至刻度，摇匀。

总离子强度调节缓冲液：87.7mL磷酸二氢钠溶液（1mol/L）与12.3mL磷酸氢二钠溶液（1mol/L）混合即得。

糖精钠标准溶液：准确称取0.0851g经120℃干燥4h后的糖精钠结晶移入100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀备用。此溶液每毫升相当于1.0mg糖精钠（C6H4CONNaSO2·2H2O）。

（2）仪器。

精密级酸度计或离子活度计或其他精密级电位计，准确到±1mV。

糖精选择电极。

217型甘汞电极：具双盐桥式甘汞电极，下面的盐桥内装入含1%琼脂的氯化钾溶液（3mol/L）。

磁力搅拌器。

透析用玻璃纸。

半对数纸。

（3）试样提取。

液体试样：浓缩果汁、饮料、汽水、汽酒、配制酒等。准确吸取25mL均匀试样（汽水、汽酒等需先除去二氧化碳后取样）置于250mL分液漏斗中，加2mL盐酸（6moL/L），用20mL、20mL、10mL乙醚提取三次。合并乙醚提取液，用5mL经盐酸酸化的水洗涤一次，弃去水层，乙醚层转移至50mL容量瓶，用少量乙醚洗涤原分液漏斗合并入容量瓶，并用乙醚定容至刻度，必要时加入少许无水硫酸钠，摇匀，脱水备用。

含蛋白质、脂肪、淀粉量高的食品：糕点、饼干、酱菜、豆制品、油炸食品、称取20.00g切碎试样，置透析用玻璃纸中，加50mL氢氧化钠溶液（0.02mol/L），调匀后将玻璃纸口扎紧，放入盛有200mL氢氧化钠溶液（0.02mol/L）的烧杯中，盖上表面皿，透析24h，并不是搅动浸泡液。量取125mL透析液，加约0.4mL盐酸（6mol/L）使成中性，加20mL硫酸铜溶液混匀，再加4.4mL氢氧化钠溶液（40g/L），混匀。静置30min，过滤。取100mL滤液于250mL分液漏斗中，以下操作同上。

蜜饯类：称取10.00g切碎的均匀试样，置透析用玻璃纸中，加50mL氢氧化钠溶液（0.06mol/L），调匀后将玻璃纸扎紧，放入盛有200mL氢氧化钠溶液（0.06mol/L）的烧杯中，透析、沉淀、提取操作同上。

糯米制食品：称取25.00g切成米粒状的小块的均匀试样，以下操作同上。

（4）测定。

标准曲线的绘制：准确吸取0mL、0.5mL、1.0mL、2.5mL、5.0mL、10.0mL糖精钠标准溶液（相当于0mg、0.5mg、1.0mg、2.5mg、5.0mg、10.0mg糖精钠）。分别置于50mL容量瓶中，各加5mL总离子强度调节缓冲液，加水至刻度，摇匀。

将糖精选择电极和甘汞电极分别与测量仪器的负端和正端相连接，将电极插入盛有水的烧杯中，按其仪器的说明书调节至使用状态，在搅拌下用水洗至电极起始电位（例如某些电极起始电位达-320mV）。取出电极用滤纸吸干，将上述标准系列溶液按低浓度到高浓度逐个测定，得其在搅拌时的平衡电位值（-mV）。

在半对数纸上以mL（mg）为纵坐标；电位值（-mV）为横坐标绘制标准曲线。准确吸取20mL乙醚提取液置于50mL烧杯中，挥发至干，残渣加5mL总离子强度调节缓冲液。小心转动，振摇烧杯内容物全部定量转移入50mL容量瓶中，原烧杯用少量水多次漂洗后，并入容量瓶中，最后加水至刻度摇匀。依法测定其电位值（-mV），查标准曲线求得测定液中糖精钠毫克数。

试样中糖精钠的含量按下式进行计算。

式中：X——试样中糖精钠的含量，g/k或g/L；

A——测定液中糖精钠的质量，mg；

K——乙醚提取液的体积，mL；

V1——分取乙醚提取液的体积，mL；

V2——试样的质量或体积，g或mL。

本法对苯甲酸钠的浓度在200～1000mg/kg时无干扰；山梨酸的浓度在50～500mg/kg，糖精钠含量在100～150mg/kg，有3%～10%的正误差；水杨酸及对羟基苯甲酸酯等对本法的测定有严重干扰。