检定项目及方法详解

对新制造的指针式仪器，不检线性误差。使用后的指针式仪器，除线性误差外，也可不检绝缘电阻。

对新制造的数字显示及打印式仪器，要检定所有指标。使用后的数显及打印式仪器，可不检绝缘电阻。

1.外观检查

用目视方法，按外观要求进行检测。

2.稳定度

选用492nm波长，A、B类仪器在吸光度0.0处，C、D、E类仪器1.0处（测量标称值为1.0的光谱中性滤光片），记录下仪器的吸光度值。隔10min后再测一次。求出两次吸光度之差ΔA。A、B类仪器稳定度按公式8-1计算；C、D、E类仪器稳定度，按式8-2计算。

式中：A——仪器吸光度初始值（或第一次打印的平均值）；A1、A2——分别代表第一次和第二次测得的吸光度。

仪器随电源电压变化稳定度的检定方法：波长仍选492nm，将仪器接到调压变压器的输出端，输出电压调在220V。对于A、B类仪器，在吸光度0.0处，C、D、E类仪器1.0处（测量标称值为1.0的光谱中性滤光片），记录下仪器的吸光度值。然后，将电压分别调到198V和242V，再次测量，并记录下电压变化后的示值。计算198V和242V分别同220V时所测数据之差ΔA。A、B类仪器随电压变化的稳定性按式8-1计算，C、D、E类仪器随电压变化的稳定性按式8-2计算仪器。

3.波长准确度及透光特性

对于波长连续调节式酶标仪，是用标准滤光片去检定仪器的波长准确度。对于使用滤光片滤光的酶标仪，是用标准分光光度计去测定酶标仪所用滤光片的透光特性。

（1）对C类仪器，用峰值波长为405、492、620nm的3块标准干涉滤光片（也可以使用检定分光光度计用的45号、55号及65号滤光片），分别置于仪器的出光孔前，滤光片的平面应与光束垂直。由短波向长波方向慢慢改变波长，当调到最小OD（即A）值时停止转动，记录下此时波长显示器所显示的波长。连续测量3次。

将测出的3个波长值平均后，与上级计量部门给出的该滤光片的标准波长值相减，其差值即是该点的波长准确度。

采用相同的方法，用另外两块滤光片测量仪器另外两点的波长准确度。从3个（准确度）值中取较大的一个，作为酶标仪的波长准确度。

（2）对于使用滤光片滤光的酶标仪，应先将仪器所用的滤光片拆下来，将滤光片垂直放到分光光度计的比色皿处的光路中，用标准分光光度计自动扫描出，或手动分光光度计逐点找出滤光片的峰值波长及最大透射比，连续测量3次。

用3次测量的波长平均值与各滤光片的标称值之差，作该滤光片的波长准确度。

用3次测量的最大透射比的平均值作为该滤光片的峰值透射比。

同时，还要找出每块滤光片最大透射比（两侧）的1/2处所对应的两个波长，用较长（大）的波长值减去较短（小）的波长值作为该滤光片的半宽度。

4.吸光度准确度

分别在405、492、620nm的波长下，以空气为参比，测量标称值为0.5和1.0的光谱中性波光片。A、B、C、E类仪器用专用测试板代替酶标板，连续测量3次，依次记录其示值。

对于吸收池固定的仪器，先用空吸收池调节仪器的零点。然后将两块光谱中性滤光片依次放入样品室中，每个滤光片连续测量3次。

将3次测得的值平均后，与该滤光片的标准值相减，其差值即是仪器的吸光度准确度。

5.吸光度重复性

对于D类仪器，选用405nm的波长，先用二次蒸馏水调零，然后去测量200μg/ml的重铬酸钾测试液，重复测量5次。

其他类仪器，波长选择405nm，在酶标板的第一排全部加空白溶液，第二排加浓度为200μg/ml的重铬酸钾测试液，重复测量5次，并记录下第二排的吸光度值。

选第二排中任一孔，取其5次测量值作重复性计算。

重复性δA的计算公式见式8-3。

式中：Ai——第i次测量的吸光度值。

该公式的含义为：在5次测量中，偏离测量平均值的最大一个数与该平均值相减，然后除以5次测量平均值，取其百分比，即为重复性。

【例】5次测量值分别为0.473，0.474，0.476，0.476，0.476，求其重复性。

【解】5次测量平均值为（0.473+0.474+0.476+0.476+0.476）/5=0.475；δA=×100%=0.4%。(www.xing528.com)

【答】重复性为0.4%。符合规程要求。

6.线性误差

对D类仪器（不含指针式）来说，选用540nm的波长，以空气为参比，调节仪器的零点，将标称值为0.5和1.0的中性滤光片，分别放入样品室中，每块滤光片连续测量3次，依次记录仪器示值。

将以上两中性滤光片叠加后置入样品室中，重复测量3次，依次记录示值。

对A、B、E类仪器，选用540nm的波长，将标称值为0.5和1.0的中性波光片，分别放入专用测试板样品位置中，以空气为参比，各重复测量3次。

将两中性滤光片叠加后置入专用测试板同一孔位中，重复测量3次，依次记录其示值。

线性误差aA按公式8-4计算：

式中：——第一块中性滤光片的吸光度平均值；——第二块中性滤光片的吸光度平均值；——两块中性滤光片叠加后的吸光度平均值。

【解】aA=[（0.508+0.957-1.440）/0.508+0.957]×100%=1.7%

【答】线性误差为1.7%，符合要求。

经过对规程的深入理解，可以将上述4、5、6三条合并为“吸光度、吸光度重复性及线性误差的检定方法”一条，合并后的条文为：将0.5和1.0两块标准滤光片同时平放到专用测试板上。以空气为参比，在405nm和620nm波长下各测量3次。在492nm波长下先连续测量5次，然后，将两块标准滤光片叠加后再测量3次（具体步骤见仪器说明书）。取405、492和620nm三种波长下前三次测量的平均值与其吸光度标准值之差作被检仪器的吸光度准确度。（吸光度准确度公式不变）。

先算出0.5中性滤光片在492nm时，某一孔的5次测量平均值Aˉ，再找出5次测量中偏离平均值最大的一个数值Amax，则，吸光度重复性δA的计算公式见式8-5：

将0.5A和1A的中性滤光片在492nm时前3次测量平均值分别定为A1和A2。将0.5A和1A两块中性滤光片叠加后3次测量平均值定为A1，2。线性误差aA按公式8-6计算。

此种方法和规程的区别主要有以下3点：

（1）将原规程中分别测量0.5A和1.0A两块中性滤光片的值改成了同时测量，这首先节省了测量中性滤光片时的一半测量时间。

（2）用492nm中性滤光片（固体标准物质）代替重铬酸钾溶液做吸光度重复性的测定。改用固体标准物质测量重复性有五大好处：一是省去配制重铬酸钾溶液的时间；二是可节省配制溶液所需要的干燥箱、天平和移液器等设备；三是节省了使用重铬酸钾溶液本身及双蒸水的费用；四是便于携带和保管；五是使检定操作方便省时，提高了检定效率。

这样考虑的依据是：首先是对酶标分析仪来说，重复性考查的对象一是仪器的光源（含光源电路）；二是仪器的整个信号通路；三是仪器的显示器。而这三者的稳定与否均和所测的对象是固体还是液体无关。其次是，类似的仪器（无论是单光束紫外分光光度计还是可见分光光度计）均是采用测量固体标准物质来作考查重复性的。酶标分析仪与分光光度计的工作原理完全相同，也应该能用这种方法。

（3）用492nm代替了540nm来做线性误差测定。其理由之一是：许多酶标分析仪（如Σ960、DV990BV以及WellscanMK3型等型号）根本就不配备540nm的滤光片，无法在540nm波长下测量线性误差。而酶标仪几乎没有不配备490（492）nm滤光片的。理由之二是：从工作原理上看，造成线性误差的主要原因是被测液因浓度范围过大而偏离了朗伯-比尔定律，使吸光度A与浓度c不成线性比例。减少线性误差的方法应在仪器的电路部分或数据处理部分加以校/修正，使其基本上保持在线性范围之内。由此可知，线性误差无论是其产生原因还是校正方法均与测试波长不相关。而改在492nm下测，可以明显节省时间，提高工作效率。

综上所述，若将规程的17、18、19三条合为一条，并采用上述方法测试，可将原先完成上述三条检定所需要的32次测试（17条测18次，18条5次，19条9次）简化为14次。缩短一半以上检定时间。

但与规程相比，线性误差的测量不在同一位置，如认为此方法不那么严谨，可仍然用规程规定的方法，在同一位置测量。只是要多增加3次测量。

7.换挡偏差

对带有T（τ）-A（透射比-吸光度）转换挡的仪器，选用492nm的波长，按照仪器说明书调节有关旋钮，作透射比100和吸光度0.000、透射比10和吸光度1.0校正。校正后，调节酶标仪的有关旋钮，将酶标仪的透射比调到50，然后换到吸光度测量挡，此时，酶标仪所显示的吸光度数值与0.301之差，即为仪器的换挡偏差。

8.测试速度

D类仪器，选用492nm的波长，将空白溶液注入吸收池中，启动负压泵，用秒表测量抽出全部溶液所需要的时间，即为其测试速度。

其他类仪器，放入96孔酶板，用秒表测量从测量开始到仪器打印或显示出全部数据所需要的时间，即为其测试速度。

为了节省测量时间，在测量其他指标时，将这一条插空测量一下即行。

9.绝缘电阻

用500V兆欧表，测量仪器电源进线端与机壳（或接地端子）间的绝缘电阻。