高效液相色谱法测定低聚果糖总含量优化方案

一、实验原理

由于进入色谱柱的各组分在流动相和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用的不同，随流动相在色谱柱两相之间进行反复多次的分配，由于各组分在色谱柱中的移动速度不同，经过一定长度的色谱柱后，各个组分被分离并按顺序流出色谱柱，通过信号检测器显示出各组分的信号谱峰数值，以保留时间定性，以峰值定量。

二、主要材料和设备

1.药品材料

（1）二次蒸馏水或超纯水（过0.45mm水系微孔滤膜）。

（2）乙腈色谱纯。

（3）混合标样标准溶液 葡萄糖、果糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖、蔗果六糖的标准品，分别用超纯水配成40mg/mL的水溶液。

2.实验设备

（1）高效液相色谱仪（配有示差折光检测器和柱恒温系统）。

（2）流动相真空抽滤脱气装置及微孔膜（0.2m、0.45m）。

（3）色谱柱：氨基柱。

（4）分析天平（感量0.0001g）。(www.xing528.com)

（5）微量进样器（10L）。

三、方法步骤

1.样品溶液的制备

称取适量糖浆或糖粉样品，用超纯水定容至100mL摇匀后，用0.45m膜过滤，收集滤液，作为待测试样溶液。

2.测定

（1）流动相为乙腈：水=75：25。在测定的前一天安上色谱柱，柱温为室温，接通示差折光检测器电源，预热稳定，以0.1mL/min的流速通入流动相平衡过夜。正式进样分析前，若使用示差折光检测器，将所用流动相以0.1mL/min的流速输入参比池20min以上，再恢复正常流路使流动相经过样品池，调节流速至1.0mL/min，走基线，待基线走稳后即可进样，进样量为5～10m。

（2）将混合标准溶液在0.4～40mg/mL范围内配制6个不同浓度的标准液系列，分别进样后，以标样浓度对峰面积作标准曲线。线性相关系数应为0.9990以上，否则需调整浓度范围。

（3）将混合标样标准溶液和制备好的试样分别进样。根据标样的保留时间定性样品中各种糖组分的色谱峰，根据样品的峰面积，以外标法计算各种糖组分的百分含量。

四、结果的计算

（1）求出样品中各组分含量（%）样品中各组分（葡萄糖、果糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖、蔗果六糖等）占干物质的量，%。

（2）计算样品中低聚果糖的含量（%）。