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氨基酸态氮的测定方法及规定

时间:2023-06-22 理论教育 版权反馈
【摘要】:与蛋白质不同,氨基酸的含氮量可直接测定,故称氨基酸态氮。《黄酒》和《酿造酱油》对氨基酸态氮含量的规定限值根据黄酒、酱油的分类和等级的不同而不同,同时规定了黄酒、酱油中氨基酸态氮的测定方法。将酸度计的复合电极插入被测液,用NaOH标准溶液滴定,根据酸度计指示的pH值判断和控制滴定的终点,通过NaOH标准溶液的消耗量可以计算出样品中氨基酸态氮的含量。酱油中氨基酸态氮的含量按式计算。

氨基酸态氮的测定方法及规定

原料中的蛋白质可以被酶、酵母、酸或碱水解,其水解的最终产物为氨基酸。氨基酸含量一直是某些发酵产品(如调味品)的质量指标,也是许多保健食品的质量指标。与蛋白质不同,氨基酸的含氮量可直接测定,故称氨基酸态氮。

黄酒》(GB/T 13662—2008)和《酿造酱油》(GB 18186—2000)对氨基酸态氮含量的规定限值根据黄酒、酱油的分类和等级的不同而不同,同时规定了黄酒、酱油中氨基酸态氮的测定方法。

1.原理

氨基酸是两性化合物,加入甲醛以固定氨基的碱性,使羧基显示酸性。将酸度计的复合电极插入被测液,用NaOH标准溶液滴定,根据酸度计指示的pH值判断和控制滴定的终点,通过NaOH标准溶液的消耗量可以计算出样品中氨基酸态氮的含量。

2.试剂和仪器

(1)试剂 所有试剂均为分析纯,水为除CO2蒸馏水或同等纯度的水(以下简称水)。

1)0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液:按GB/T 601—2002配制与标定。

2)0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液:量取100mL 0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液稀释到200mL(用时当天稀释)。

3)甲醛溶液:36%~38%(无缩合沉淀)。

4)pH=6.86的标准缓冲溶液:称取预先于115℃烘干2h的磷酸二氢钾(KH2PO4)3.40g和磷酸氢二钠(Na2HPO4)3.55g,加入无二氧化碳的水溶解并定容至1000mL,摇匀。

5)pH=4.01的标准缓冲溶液:称取预先于115℃烘干2h的邻苯二甲酸氢钾10.32g,加入无二氧化碳的水溶解并定容至1000mL,摇匀。

(2)仪器 自动电位滴定仪或酸度计:精度为0.01个pH单位,附磁力搅拌器。

3.测定步骤

(1)校正自动电位滴定仪或酸度计 按仪器使用说明书校正自动电位滴定仪或酸度计。

(2)黄酒的测定 吸取样品10.0mL(V)置于150mL烧杯中,加50mL水。向烧杯中放入磁力搅拌棒,置于磁力搅拌器上,开始搅拌,用0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液滴定。开始时滴定速度可稍快,当样液pH=7.0时,放慢滴定速度,每次滴加半滴0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液直至pH=8.2为其终点,记录消耗0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积。加入10mL甲醛溶液,混匀,继续用0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH=9.2,记录加甲醛溶液后消耗0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积。同时做空白试验,分别记录不加甲醛溶液及加入甲醛溶液时,空白试验所消耗掉的0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积。

(3)酱油 准确吸取酱油5.0mL,置于100mL容量瓶中,加水至刻度,混匀后吸取20.0mL,置于200mL烧杯中,加水60mL,插入酸度计的复合电极,开动磁力搅拌器,用0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液滴定至酸度计指示pH=8.2,记录用去0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积。

向上述溶液中,准确加入甲醛溶液10mL,混匀,再用0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH=9.2,记录用去加甲醛后消耗0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积。

试剂空白试验:取水80mL,先用0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH=8.2,记录用去0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积,再准确加入10mL甲醛溶液,继续用0.050mol/L氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH=9.2,记录加甲醛后所用0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积。

4.结果计算

黄酒中氨基酸态氮含量按式(7-2-8)计算。

式中 X1——试样中氨基酸态氮的含量(g/L);

c——0.1mol/L NaOH标准滴定溶液的浓度(mol/L);

V1——样品溶液加入甲醛后消耗0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积(mL);

V2——空白溶液加入甲醛后消耗0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积(mL);(www.xing528.com)

14——氮的摩尔质量(g/mol);

V——吸取试样的体积(mL)。

酱油中氨基酸态氮的含量按式(7-2-9)计算。

式中 X1——试样中氨基酸态氮的含量(g/L);

c——0.1mol/L NaOH标准滴定溶液的浓度(mol/L);

V1——样品溶液加入甲醛后消耗0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积(mL);

V2——空白溶液加入甲醛后消耗0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积(mL);

14——氮的摩尔质量(g/mol);

V——吸取试样的体积(mL)。

酱油中氨基酸态氮的含量按式(7-2-9)计算。

式中 X——样品中氨基酸态氮的含量(g/100mL);

V——吸取试样的体积(mL);

V3——样液中加入甲醛后所耗0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积(mL);

V4——空白试验中加入甲醛后所耗0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积(mL);

c——0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的浓度(mol/L);

0.014——1.00mL氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=1.000mol/L]相当于氮的质量(g/mmol);

式中 X——样品中氨基酸态氮的含量(g/100mL);

V——吸取试样的体积(mL);

V3——样液中加入甲醛后所耗0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积(mL);

V4——空白试验中加入甲醛后所耗0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积(mL);

c——0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的浓度(mol/L);

0.014——1.00mL氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=1.000mol/L]相当于氮的质量(g/mmol);

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