测定植物性食品中三唑酮残留量

三唑酮属于三唑类、内吸杀菌剂，1974年开发研制。其纯品为无色固体，难溶于水，易溶于有机溶剂。对蔬菜、果树、葡萄、烟草、花卉、大麦、小麦的白粉病和锈病有明显的防治效果。其毒性低，对蜜蜂安全，未发现有慢性毒性问题。

三唑酮的杀菌机制极为复杂，主要是抑制菌体麦角甾醇的生物合成，因而抑制或干扰菌体附着孢及吸器的发育以及菌丝的生长和孢子的形成。对于某些病菌，三唑酮在活体中活性很强，但离体效果很差。其对菌丝的活性比对孢子的活性强。三唑酮可与许多杀菌剂、杀虫剂、除草剂等现混现用。

目前，国家标准《植物性食品中三唑酮残留量的测定》（GB/T 5009.126—2003）中植物性食品中三唑酮残留量的测定方法为气相色谱法。

1.原理

试样中三唑酮残留物经提取、净化后用气相色谱法测定。

氮磷检测器对含氮化合物具有较好的灵敏度。三唑酮及其主要代谢物羟锈宁与铷盐蒸气相作用，产生CN-离子流，使检测器收集极的电信号发生变化，这种变化过程被记录下来。将试样色谱图上三唑酮和羟锈宁的峰高与标样色谱图相比，计算出三唑酮残留量。

出峰顺序：三唑酮、羟锈宁。

2.试剂

（1）常用试剂 丙酮、二氯甲烷、氯化钠、无水硫酸钠（于600℃烘4h备用）、活性炭、三氯甲烷。

（2）弗罗里硅土（Florisil） 60～100目，于650℃烘5h，加3.5%（质量分数）水脱活，稳定4～6天。

（3）农药标准溶液 精密称取三唑酮和羟锈宁标准品各50.00mg，加丙酮溶解，分别定容至100mL，作为储备液，放在冰箱中保存。此溶液每毫升相当于三唑酮或羟锈宁500μg。

临用时吸取三唑酮和羟锈宁储备液等量混合，用丙酮逐级稀释为使用液，三唑酮和羟锈宁的质量浓度一般为1.00μg/mL。

3.仪器

小型粮食粉碎机、高速组织捣碎机、超声波发生器或往返式振荡器、旋转蒸发仪、气相色谱仪（具有氮磷检测器）。

4.试验步骤

（1）提取

1）粮食：称取30.0g粉碎后过60目筛的试样，置于500mL具塞锥形瓶中，加入80mL丙酮和20mL蒸馏水，静置过夜后用振荡器提取1h，抽滤，残渣用丙酮洗涤（两次，每次均为30mL），合并提取液和洗涤液，在旋转蒸发仪上浓缩（水浴40～45℃，下同），除去大部分丙酮，然后移至250mL分液漏斗中，依次加入50mL蒸馏水、10mL饱和氯化钠水溶液、40mL二氯甲烷，振摇2min，静置分层，将下层有机相移至锥形瓶中，水相用20mL二氯甲烷再提取一次，弃去水相，将合并的有机相经无水硫酸钠脱水（无水硫酸钠10g左右）后收集在250mL梨形瓶中，置于旋转蒸发仪上浓缩近干，取下梨形瓶，置于水浴上使二氯甲烷挥干后，用少量丙酮多次洗涤梨形瓶内壁，将洗涤液收集至刻度试管中，用丙酮定容至5mL，供气相色谱测定用。

2）瓜果和蔬菜：称取50.0g经组织捣碎机捣碎的试样匀浆，置于500mL具塞锥形瓶中，加1g活性炭、80mL丙酮，摇匀，置于超声波发生器上提取10min，抽滤，向残渣中加100mL丙酮浸泡过夜，再用超声波发生器提取30min，用丙酮洗涤（两次，每次都为20mL）残渣和容器，合并提取液与洗涤液，置于旋转蒸发仪上浓缩至100mL，移至分液漏斗中，加30mL蒸馏水、12mL饱和氯化钠水溶液、40mL二氯甲烷，以下从1）中“振摇2min”起操作。

（2）净化 若测定时有干扰峰影响定量结果，则样液可用柱层析法进一步净化。

玻璃层析柱内径为1.2cm，长度为30cm，底部加1.5cm高的无水硫酸钠。称取10g混合吸附剂（弗罗里硅土与活性炭的质量比为9∶1），以（1+30）丙酮-三氯甲烷混合液湿法装柱，上层再加1.5cm高的无水硫酸钠，加入提取浓缩液，以（1+30）150mL丙酮-三氯甲烷混合液淋洗[粮食用45mL（1+19）丙酮-三氯甲烷、85mL（1+49）丙酮-三氯甲烷混合液淋洗]。收集淋出液于梨形瓶中，在旋转蒸发仪上浓缩近干，用水浴使三氯甲烷挥发尽，用丙酮定容，供气相色谱测定用。

（3）测定

1）色谱条件：色谱柱的内径为3mm，长度为1.6m，玻璃柱，内装涂有4%OV-17和4%OV-210混合固定液的80～100目ChromosorbW AW-DMCS。(www.xing528.com)

2）气流量：载气（N₂）为70mL/min，氢气为3.6mL/min，空气为160mL/min。

3）温度：柱温为220℃，汽化室（进样口）温度为290℃，检测室温度为290℃。

5.结果计算

式中 X——试样中三唑酮的残留量（mg/kg）；

c₁——样液中三唑酮的含量（μg/mL）；

c₂——样液中羟锈宁的含量（μg/mL）；

V——样液最后定容体积（mL）；

m——试样质量（g）。

计算结果保留两位有效数字。

6.精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

7.试验说明

1）本方法适用于粮食、蔬菜和水果中三唑酮残留量的测定。

2）本方法中三唑酮的检出限为2.8×10^-10g。

3）试样一般不经柱层净化，但如果需经柱净化，对不同批号的弗罗里硅土，应预先做淋洗曲线，以保证农药得到充分的回收。

4）色谱图如图7-6-6所示。

图7-6-6 色谱图

注：质量浓度均为1μg/mL；4.625为三唑酮，6.092为羟锈宁。