动物血液功能性成分制备研究

（一）血红素铁

血红素铁，又称卟啉铁，是由卟啉和一分子亚铁构成的铁卟啉化合物，分子式为C34 H30 N4O4 Fe，相对分子质量为614.48。血红素铁是呈暗紫色的细微针状结晶或黑褐色颗粒、粉末，不溶于水，易氧化，含铁量为1.0%～2.5%，和其他铁强化剂相比，吸收率较高。动物血液中的血红素铁的含量较为丰富，因此从血液中制备血红素铁比较常见。血红素铁的制备方法较多，不同方法间的差异见表8-8。

表8-8　血红素铁的不同制备方法

（二）亚硝基血红蛋白

工艺流程：血液收集→加入抗凝剂→过滤→低温冷冻离心→洗涤→稀释液→均质→加入反应剂→加热搅拌→冷却→离心→洗涤→干燥→包装→成品。

工艺描述：向新鲜猪血中加入一定量的柠檬酸钠溶液抗凝，充分混合，过滤除去杂物。在0～4℃下用低温冷冻离心机3000g离心3 min，弃去上清液，用0.9%生理盐水洗涤红细胞，然后在同样的转速下离心一定时间，重复洗涤两次，立即装入储藏罐中于低温（-20℃）条件下冷冻储藏。红细胞使用前于0～4℃冷库中存放解冻，同时起到冷冻破胞的作用。为使红细胞破胞充分，红细胞中加入一定量的蒸馏水稀释后，用高速分散均质机以11000 r/min的速度破碎红细胞，破碎时间为3 min，过滤后得滤液即为血红蛋白液。在血红蛋白液中加入反应剂，其间间歇搅拌，加热。反应完毕迅速冷却至室温，以设定的转速离心一定时间。弃去上清液，用维生素C溶液洗涤离心所得沉淀物，再次离心，重复洗涤两次，沉淀物即为半干固体亚硝基血红蛋白。(www.xing528.com)

（三）血浆蛋白粉

工艺流程：血液收集→加入抗凝剂→过滤→杀菌→高速离心分离→血浆液→去盐→喷雾干燥→包装→成品。

工艺描述：向新鲜猪血中加入一定量的柠檬酸钠溶液抗凝，与血液充分混合，过滤除去杂物。用高速离心机在0～4℃下以设定的速度离心5 min，将猪血分离出血浆液。血浆液在脱盐处理后，经一定时间喷雾干燥后得到血浆蛋白粉。

（四）生物活性肽

生物活性肽是蛋白质中20个天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的复杂线性、环形结构的不同肽类的总称，有促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等作用。黄和平等研究了利用木瓜蛋白酶酶解鳄鱼血蛋白酶解产物的抗氧化特性和对血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme，ACE）的抑制活性，结果表明鳄鱼血经酶解之后既有良好的亚铁离子螯合能力、还原能力及ABTS和DPPH自由基清除能力，又表现出良好的ACE抑制活性。孙骞等采用6种蛋白酶在各自最适反应条件下分别酶解猪血红蛋白8h，得出采用AS1398中性蛋白酶酶解过程中2h内获得的抗氧化活性肽还原力最高，较猪血红蛋白还原力高31.8%。Kazue Mito等通过酶解猪血中的珠蛋白得到了4种具有抑制ACE活性的多肽，分别为FQKVVA、FQKVVAG、FQKVVAK、GKKVLQ，它们对ACE活性的抑制率（IC50）分别为518μmol/L、714 μmol/L、211μmol/L、119 μmol/L。Froidevaux等从牛血红蛋白的胃蛋白酶水解物中分离鉴定出了一个抗菌肽，氨基酸序列为VLSAADKGNVKAAWGKVGGHAAE。Piot等用胃蛋白酶水解牛血红蛋白，分离出两种具有阿片样活性的多肽，它们是LVVhemorphin-7（LVVYPWTNRF）及VVhemorphin-7（VVYPWTNRF）。由于动物血液廉价，容易获取，从动物血液中提取生物活性肽具有明显的优势。

（五）超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）

SOD是一种能够催化超氧化物通过歧化反应转化为氧气和过氧化氢的酶，是一种重要的抗氧化剂，在自然界中广泛存在。利用廉价、来源广泛的动物血液制备SOD，是20世纪90年代以前最常用的方法。由于这种方法存在交叉感染、其他污染物难以清除和过敏反应等风险，欧盟委员会已于1999年发文禁止将动物血液中提取的SOD用于人类的健康产业。但因为从动物血液中提取SOD成本低、工艺简单，很长时间内无法全面禁止。区炳庆等以鸭血为原料，加草酸钾洗涤，加入溶剂乙醇-氯仿、丙酮提纯后，得到纯度较高的SOD。刘晓红等以猪血为原料，用铜、锌离子保护SOD，两种离子的硫酸盐对SOD的保护较好。周全法等用Mccord方法和热变性法结合，从鹿血红细胞中提取Cu/Zn-SOD，操作方法简单。周亚迪以新鲜鸭血为原料，通过55.3℃的热变性处理，添加3.9%硫酸锌，加热12 min，得到的超氧化物歧化酶比活性为224.37 IU/mg。