1.原理
用乙醚和石油醚抽提样品的碱水解液，通过蒸馏或蒸发去除溶剂，测定溶于溶剂中的抽提物的质量。
2.仪器与试剂
（1）仪器 分析天平（感量为0.1mg）、离心机（可用于放置抽脂瓶或管，转速为500～600r/min，可在抽脂瓶外端产生80～90g的重力场）、烘箱、水浴、抽脂瓶（抽脂瓶应带有软木塞或其他不影响溶剂使用的瓶塞，如硅胶或聚四氟乙烯。软木塞应先浸于乙醚中，后放入60℃或60℃以上的水中保持至少15min，冷却后使用。不用时需浸泡在水中，浸泡用水每天更换一次）。
（2）试剂
1）淀粉酶：酶活力大于或等于1.5U/mg。
2）氨水（NH4OH）：质量分数约为25%。
3）乙醇（C2H5OH）：体积分数至少为95%。
4）乙醚（C4H10O）：不含过氧化物，不含抗氧化剂，并满足试验的要求。
5）石油醚（CnH2n+2）：沸程为30～60℃。
6）混合溶剂：等体积混合乙醚和石油醚，使用前制备。
7）碘溶液（I2）：约为0.1mol/L。
8）刚果红溶液（C32H22N6Na2O6S2）：将1g刚果红溶于水中，稀释至100mL。
9）盐酸（6mol/L）：量取50mL盐酸（浓度为12mol/L）缓慢倒入40mL水中，定容至100mL，混匀。
3.操作步骤
（1）用于脂肪收集的容器（脂肪收集瓶）的准备于干燥的脂肪收集瓶中加入几粒沸石，放入烘箱中干燥1h，然后使脂肪收集瓶冷却至室温，称量，精确至0.1mg。
（2）空白试验 空白试验与样品检验同时进行，使用相同步骤和相同试剂，但用10mL水代替试样。
（3）测定
1）称取混匀后的试样约1g（精确至0.0001g）。
①不含淀粉样品：加入10mL温度为65℃±5℃的水，将试样洗入抽脂瓶的小球中，充分混合，直到试样完全分散，放入流动水中冷却。
②含淀粉样：将试样放入抽脂瓶中，加入约0.1g的淀粉酶和一小磁性搅拌棒，混合均匀后，加入8～10mL温度为45℃的蒸馏水，注意液面不要太高。盖上瓶塞于搅拌状态下置于65℃水浴中2h，每隔10min摇混一次。为检验淀粉是否水解完全，可加入两滴浓度约为0.1mol/L的碘溶液，若无蓝色出现，则说明水解完全，否则将抽脂瓶重新置于水浴中，直至无蓝色产生。冷却抽脂瓶。
2）加入2.0mL氨水，充分混合后立即将抽脂瓶放入65℃±5℃的水浴中，加热15～20min，不时取出振荡。取出后，冷却至室温，静止30s后可进行下一步操作。
3）加入10mL乙醇，缓和但彻底地进行混合，避免液体太接近瓶颈。如果需要，则可加入两滴刚果红溶液。
4）加入25mL乙醚，塞上瓶塞，将抽脂瓶保持在水平位置，将小球的延伸部分朝上夹到摇混器上，按约100次/min的频率振荡1min，也可采用手动振摇方式，但均应注意避免形成持久乳化液。抽脂瓶冷却后小心地打开塞子，用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈，使冲洗液流入抽脂瓶。
5）加入25mL石油醚，塞上重新润湿的塞子，按上述方法轻轻振荡30s。
6）将加塞的抽脂瓶放入离心机中，在500～600r/min的转速下离心5min，否则将抽脂瓶静止至少30min，直到上层液澄清，并明显与水相分离。
7）小心地打开瓶塞，用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈内壁，使冲洗液流入抽脂瓶。如果两相界面低于小球与瓶身相接处，则沿瓶壁边缘慢慢地加入水，使液面高于小球和瓶身相接处，以便于倾倒。
8）将上层液尽可能地倒入已准备好的加入沸石的脂肪收集瓶中，避免倒出水层。
9）用少量混合溶剂冲洗瓶颈外部，将冲洗液收集在脂肪收集瓶中。要防止溶剂溅到抽脂瓶的外面。(www.xing528.com)
10）向抽脂瓶中加入5mL乙醇，用乙醇冲洗瓶颈内壁，按3）所述进行混合。重复4）～9）操作，再进行第二次抽提，但只用15mL乙醚和15mL石油醚。
11）重复3）～9）操作，再进行第三次抽提，但只用15mL乙醚和15mL石油醚。如果产品中脂肪的质量分数低于5%，则可只进行两次抽提。
12）合并所有提取液，既可采用蒸馏的方法除去脂肪收集瓶中的溶剂，也可于沸水浴上蒸发至干来除掉溶剂。蒸馏前用少量混合溶剂冲洗瓶颈内部。
13）将脂肪收集瓶放入102℃±2℃的烘箱中加热1h，取出脂肪收集瓶，冷却至室温，称量，精确至0.1mg。
14）重复上一步操作，直到脂肪收集瓶两次连续称量差值不超过0.5mg，记录脂肪收集瓶和抽提物的最低质量。
15）为验证抽提物是否全部溶解，向脂肪收集瓶中加入25mL石油醚，微热，振摇，直到脂肪全部溶解。如果抽提物全部溶于石油醚中，则含抽提物的脂肪收集瓶的最终质量和最初质量之差，即为脂肪含量。
16）若抽提物未全部溶于石油醚中，或怀疑抽提物不完全为脂肪，则用热的石油醚洗提。小心地倒出石油醚，不要倒出任何不溶物，重复此操作3次以上，再用石油醚冲洗脂肪收集瓶口的内部。最后，用混合溶剂冲洗脂肪收集瓶口的外部，避免溶液溅到瓶的外壁。将脂肪收集瓶放入102℃±2℃的烘箱中，加热1h，按13）和14）所述操作。
17）取14）中测得的质量和16）测得的质量之差作为脂肪的质量。
4.结果计算
样品中脂肪的含量按式（2-3-18）计算。
式中 X——样品中脂肪的含量（g/100g）；
m——样品的质量（g）；
m1——操作步骤14）中测得的脂肪收集瓶和抽提物的质量（g）；
m2——脂肪收集瓶的质量，或在有不溶物存在下，操作步骤16）中测得的脂肪收集瓶和不溶物的质量（g）；
m3——空白试验中，脂肪收集瓶和操作步骤14）中测得的抽提物的质量（g）；
m4——空白试验中脂肪收集瓶的质量，或在有不溶物存在时，操作步骤16）中测得的脂肪收集瓶和不溶物的质量（g）。
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。
5.精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果之差应符合：脂肪含量大于或等于15%时，测定结果之差应小于或等于0.3g/100g；脂肪含量为5%～15%时，测定结果之差应小于或等于0.2g/100g；脂肪含量小于或等于5%时，测定结果之差应小于或等于0.1g/100g。
式中 X——样品中脂肪的含量（g/100g）；
m——样品的质量（g）；
m1——操作步骤14）中测得的脂肪收集瓶和抽提物的质量（g）；
m2——脂肪收集瓶的质量，或在有不溶物存在下，操作步骤16）中测得的脂肪收集瓶和不溶物的质量（g）；
m3——空白试验中，脂肪收集瓶和操作步骤14）中测得的抽提物的质量（g）；
m4——空白试验中脂肪收集瓶的质量，或在有不溶物存在时，操作步骤16）中测得的脂肪收集瓶和不溶物的质量（g）。
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。
5.精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果之差应符合：脂肪含量大于或等于15%时，测定结果之差应小于或等于0.3g/100g；脂肪含量为5%～15%时，测定结果之差应小于或等于0.2g/100g；脂肪含量小于或等于5%时，测定结果之差应小于或等于0.1g/100g。
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
