1.原理
茶叶中的咖啡碱经沸水和氧化镁混合提取后，经高效液相色谱仪、C18分离柱、紫外检测器检测，与标准系列溶液比较定量。
2.仪器与试剂
（1）仪器 高效液相色谱仪、紫外检测器（检测波长为280nm）、分析柱[C18（ODS柱）]、分析天平（感量为0.0001g）。
（2）试剂 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。氧化镁（重质）、甲醇（色谱纯）、高效液相色谱流动相（取600mL甲醇倒入1400mL重蒸馏水，混匀，脱气）、0.5mg/mL咖啡碱标准储备液[称取125mg咖啡碱（纯度不低于99%），加（1+4）乙醇-水溶解，定容至250mL，摇匀]、标准系列工作溶液（吸取1.0mL、2.0mL、5.0mL、10.0mL0.5mg/mL咖啡碱标准储备液，分别加水定容至50mL，质量浓度分别为10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL）。
3.操作步骤
（1）试液的制备 按GB/T8302—2013的规定取样，称取1.0g（准确至0.0001g）磨碎的茶样，置于500mL烧瓶中，加4.5g氧化镁及300mL沸水，于沸水浴中加热，浸提20min（每隔5min摇动一次），浸提完毕后立即趁热减压过滤，将滤液移入500mL容量瓶中，冷却后，用水定容至刻度，混匀。取一部分试液，通过0.45μm滤膜过滤，待用。
（2）色谱条件
1）检测波长：紫外检测器，波长为280nm。
2）流动相：高效液相色谱流动相。
3）流速：0.5～1.5mL/min。
4）柱温：40℃。
5）进样量：10～20μL。
（3）测定 准确吸取制备液10～20μL注入高效液相色谱仪，并用咖啡碱标准系列工作溶液制作标准曲线，进行色谱测定。
4.结果计算
比较试样和标准样的峰面积进行定量。茶叶中咖啡碱的含量以干态质量分数表示，按式（3-2-51）计算。(www.xing528.com)
式中 c——测定液中咖啡碱的含量（μg/mL）；
V——样品总体积（mL）；
m——试样的质量（g）；
w——样品干物质含量（质量分数）。
如果符合重复性的要求，则取两次测定结果的算术平均值作为结果，保留至小数点后第一位。
5.重复性
在重复性条件下同一样品的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
式中 c——测定液中咖啡碱的含量（μg/mL）；
V——样品总体积（mL）；
m——试样的质量（g）；
w——样品干物质含量（质量分数）。
如果符合重复性的要求，则取两次测定结果的算术平均值作为结果，保留至小数点后第一位。
5.重复性
在重复性条件下同一样品的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
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