淀粉糖浆的制备及葡萄糖值测定方法优化

（1）通过实验，了解淀粉糊化及酶法制备淀粉糖浆的基本原理。

（2）掌握淀粉双酶法制备淀粉糖浆的实验方法，以及酶的使用。

（3）熟悉淀粉水解产品的葡萄糖值测定方法。

将淀粉悬浮液加热到55～80℃时，会使淀粉颗粒之间的氢键作用力减弱，并迅速进行不可逆溶胀，淀粉颗粒因吸水，体积膨胀数十倍，继续加热使淀粉胶束全部崩溃，淀粉粒形成单分子，并为水包围，形成具有黏性的糊状液体，这一现象称淀粉糊化。糊化的淀粉容易被酶、酸水解。

双酶法水解淀粉制淀粉糖浆，是以α-淀粉酶使淀粉中的α-1，4糖苷键水解生成小分子糊精，然后再用糖化酶将部分糊精、低聚糖中的α-1，6糖苷键和α-1，4糖苷键水解生成葡萄糖的过程。

淀粉糖浆的分析方法是采用莱恩-艾农测定法，测定淀粉水解产品的还原力（RP）和葡萄糖值（DE），例如DE值为42，表示淀粉糖浆中含42%的葡萄糖。

（1）实验材料 玉米淀粉、木薯淀粉、甘薯淀粉。

（2）实验试剂 液化型α-淀粉酶，糖化酶，费林试剂A、B，亚甲基蓝指示剂，D-葡萄糖标准溶液、5%碳酸钠，5%氯化钙。

（3）实验仪器 400mL烧杯，250mL圆底烧瓶，100、500mL容量瓶，移液管（1、5、10mL），25mL酸滴定管，250mL碘量瓶，秒表，搅拌器，恒温水浴锅。

（一）淀粉糖浆的制备

100g淀粉置于400mL烧杯中，加水200mL，搅拌均匀，配成淀粉浆，用5%碳酸钠调节pH至6.2～6.3，加入2mL 5% 氯化钙溶液，于90～95℃水浴上加热，并不断搅拌，淀粉浆开始糊化直至完全成糊。加入液化型α-淀粉酶60mg，不断搅拌使其液化，并使温度保持在70～80℃。然后将烧杯移至电炉加热到95℃至沸，灭火10min。过滤，滤液冷却到55℃，加入糖化酶200mg，调节pH至4.5，于60～65℃恒温水浴中糖化3～4h （取样分析，控制DE约为42%），即为淀粉糖浆，若要浓浆，可进一步浓缩。

（二） DE 值的测定

1. 混合费林试剂溶液的标定

（1）吸取25 mL混合费林试剂加入烧瓶中，加入18 mL D-葡萄糖标准溶液（0.600g无水葡萄糖加水溶解并定容至100mL），振荡后迅速升温，控制在2min左右的时间范围内沸腾，保持蒸汽充满烧瓶，以防止空气进入，沸腾持续2min后，加入1 mL亚甲基蓝指示剂，用D-葡萄糖标准溶液滴定至蓝色消失，记下耗用的体积数（mL）。

（2）调整D-葡萄糖初加量（+0.3mL），其余步骤同上，但滴定过程要在1 min之内完成，整个沸腾时间不超过3 min。记下耗用的体积数。

（3）第三次滴定时，为达到时间上的要求，可再调整D-葡萄糖初加量，其余步骤同上，终体积数应在19～21 mL之间，计算二次测定的平均体积的耗用数V₁。

2. 样品的制备

样品应混合均匀装入一个密封容器中，在容器内搅动，若表面有凝结，则应除去表面凝结部分。

3. 样品的测定

吸取25 mL混合费林试剂于烧瓶中，滴加10 mL配好的样品，加热，使溶液在2min之内沸腾，并保持瓶内充满蒸汽，加1 mL亚甲基蓝指示剂，滴定至蓝色消失。如果在样品未加入任何指示剂时蓝色消失，那么就要降低样品液的浓度，重新滴定。记下耗用的体积数V₂，应不大于25 mL。

计算样品还原力：

（1）样品大约还原力

式中 ARP——样品大约还原力，g/100g （即100g样品中还原糖的量，g）

F——标定25 mL混合费林试剂所耗用的标准葡萄糖的量，g，为（0.6 ×V₁）/100=0.006 V₁

V₁——标准葡萄糖液的耗用体积，mL

m₀——500mL样品液中样品质量，g

V₂——滴定25 mL混合费林试剂所耗用的样品液体积，mL(www.xing528.com)

由于V₁与V₂相当，所以，ARP≈300/m₀；那么估算样品质量m₀=300/ARP；

称取m₀（g）样品，精确至1 mg，通过滴定确定样品中还原糖含量在2.85～3.15 g，并记下滴定所耗样品液的准确体积数V₂（应在19～21 mL），否则要调整样品浓度。

（1）样品大约还原力

式中 ARP——样品大约还原力，g/100g （即100g样品中还原糖的量，g）

F——标定25 mL混合费林试剂所耗用的标准葡萄糖的量，g，为（0.6 ×V₁）/100=0.006 V₁

V₁——标准葡萄糖液的耗用体积，mL

m₀——500mL样品液中样品质量，g

V₂——滴定25 mL混合费林试剂所耗用的样品液体积，mL

由于V₁与V₂相当，所以，ARP≈300/m₀；那么估算样品质量m₀=300/ARP；

称取m₀（g）样品，精确至1 mg，通过滴定确定样品中还原糖含量在2.85～3.15 g，并记下滴定所耗样品液的准确体积数V₂（应在19～21 mL），否则要调整样品浓度。

（2）样品还原力

式中 m——500mL样品液中准确的样品质量，g

其他同上。

（2）样品还原力

式中 m——500mL样品液中准确的样品质量，g

其他同上。

（3）样品中葡萄糖值

式中 DE——葡萄糖值，g/100g （即100g样品中葡萄糖的量，g）

RP——样品还原力，g/100g （即100g样品中还原糖的量，g）

DMC——样品的干物质含量，%

记录消耗液体的体积数要准确。

（3）样品中葡萄糖值

式中 DE——葡萄糖值，g/100g （即100g样品中葡萄糖的量，g）

RP——样品还原力，g/100g （即100g样品中还原糖的量，g）

DMC——样品的干物质含量，%

记录消耗液体的体积数要准确。