动物性食品中氨基甲酸酯类农药多组分残留的测定方法

定性检验可用有机磷农药残留的速测卡方法。定量检测见以下介绍。

（一）原理

试样经提取、净化、浓缩、定容、微孔滤膜过滤后进样，用反相高效液相色谱分离，紫外检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

（二）试剂

（1）甲醇。重蒸。

（2）丙酮。重蒸。

（3）乙酸乙酯。重蒸。

（4）环己烷。重蒸。

（5）氯化钠。

（6）无水硫酸钠。

（7）蒸馏水。重蒸。

（8）凝胶。Bio-BeadsS-X3200-400目。

（9）氨基甲酸酯类农药（NMCs）标准。涕灭威、甲萘威、呋喃丹、速灭威、异丙威，纯度均大于99%。

（10）NMCs标准溶液配制。将5种NMCs分别以甲醇配成一定浓度的标准储备液，置于冰箱中保存。使用前取一定量标准储备液，用甲醇稀释配成混合标准应用液。5种NMCs的浓度分别为涕灭威6.0mg/L、甲萘威（西维因）5.0mg/L、呋喃丹5.0mg/L、速灭威10.0mg/L、异丙威10.0mg/L。

（三）仪器

（1）高效液相色谱仪：附紫外检测器及数据处理器。

（2）旋转蒸发仪。

（3）凝胶净化柱。长50cm，内径2.5cm，带活塞玻璃色谱柱，柱底垫少量玻璃棉，用洗脱剂（乙酸乙酯+环己烷=1+1）浸泡过夜的凝胶以湿法装入柱中，柱床高约40cm，柱床始终保持在洗脱剂中。

（四）操作方法

1.试样制备

蛋品去壳，制成匀浆；肉品切块后，制成肉糜；乳品混匀后待用。

2.提取与分配

（1）蛋类样品。称取蛋类试样20g（精确到0.01g），于100mL具塞三角瓶中，加水5mL（视试样水分含量加水，使总水量约20g，通常鲜蛋水分含量约75%，加水5mL即可），加40mL丙酮，振摇30min，加氯化钠6g，充分摇匀，再加30mL二氯甲烷，振摇30min。取35mL上清液，经无水硫酸钠滤于旋转蒸发瓶中，浓缩至1mL，加2mL乙酸乙酯-环己烷（1+1）溶液再浓缩，重复3次，浓缩至约1mL。

（2）肉类样品。称取肉类试样20g（精确到0.01g），加水6mL（视试样水分含量加水，使总水量约20g，通常鲜肉水分含量约70%，加水6mL即可），以下按照①的提取、分配步骤处理。

（3）乳类样品。称取乳类试样20g（精确到0.01g，鲜乳不需要加水，直接加丙酮提取），以下按照①的提取、分配步骤处理。(www.xing528.com)

3.净化

将浓缩液经凝胶柱以乙酸乙酯-环己烷（1+1）溶液洗脱，弃去0～35mL流分，收集35～70mL流分。将其旋转蒸发浓缩至约1mL，再经凝胶柱净化收集35～70mL流分，旋转蒸发浓缩，用氮气吹至约1mL。以乙酸乙酯定容至1mL，留待HPLC分析。

4.高效液相色谱测定

（1）色谱条件。

①色谱柱：AltimaC184.6mm×25cm。

②流动相：甲醇+水（60+40），流速0.5mL/min。

③柱温：30℃。

④紫外检测波长210nm。

（2）测定。将仪器调至最佳状态后，分别将5μL混合标准溶液及试样净化液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。氨基甲酸酯类农药（NMCs）标准色谱图见6-1。

（五）结果计算

按下式计算试样中各农药的含量：

式中：X——试样中各农药的含量，mg/kg；

m1——被测样液中各农药的质量，ng；

m——试样质量，g；

V1——样液进样体积，μL；

V2——试样最后定容体积，mL。

计算结果保留两位有效数字。

图6-1　氨基甲酸酯类农药（NMCs）标准色谱图

1.涕灭威；2.速灭威；3.呋喃丹；4.甲萘威；5.异丙威

（六）说明及注意事项

（1）本方法为GB/T5009.163-2003《动物性食品中氨基甲酸酯类农药多组分残留高效液相色谱测定》的方法。本方法适用于肉类、蛋类及乳类食品中涕灭威、速灭威、呋喃丹、甲萘威、异丙威残留量测定。

（2）涕灭威、速灭威、呋喃丹、甲萘威、异丙威为我国常用的氨基甲酸酯类农药。由于动物性食品基质的特殊性，试样净化是测定方法的关键技术之一；本方法提出了以凝胶渗透净化技术进行动物性食品中涕灭威、速灭威、呋喃丹、甲萘威、异丙威多组分残留量的测定。

（3）本方法检出限分别为涕灭威9.8μg/kg、速灭威7.8μg/kg、呋喃丹7.3μg/kg、甲萘威3.2μg/kg、异丙威13.3μg/kg。