(一)用具与药品
培养皿、长方形玻璃板、载玻片、盖玻片、滴管、0.007 g/mL生理盐水、薄荷醇(menthol)、硼砂洋红染色液、1%酸乙醇、各浓度乙醇溶液、二甲苯、中性树胶。
(二)材料
日本血吸虫、华肝蛭、布氏姜片虫等。
(三)操作步骤(以华肝蛭为例)
(1)麻醉 经过麻醉之后再固定,虫体不致收缩。撒几粒薄荷醇结晶到盛有华肝蛭的生理盐水表面,30 min后即可将华肝蛭麻醉。或者将华肝蛭放在水中静置数小时使虫体松弛。
(2)固定 在一块长方形玻璃板上铺2~3层粗滤纸,使滤纸饱浸70%乙醇。迅速将华肝蛭从生理盐水中取出,平放在滤纸上。再以蘸有70%乙醇的滤纸盖在华肝蛭上面,上加玻板,玻板上压一些较重的东西。或将一条华肝蛭夹在两张载玻片之间,用线扎牢,放在70%乙醇中固定及压平。12 h后取下染色。
(3)染色 用硼砂洋红染色2~12 h。
(4)漂洗 用70%乙醇洗10 min。
(5)分化 经1%酸乙醇分化,直至内部结构能看清楚为止。
(6)脱水 经70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ进行梯度乙醇脱水,每种试剂中停留5 min。如发现虫体卷曲,可在移入70%乙醇后,把华肝蛭夹在两张载玻片之间稍压,展平后再继续脱水。
(7)透明 分别浸入50%二甲苯、100%二甲苯Ⅰ、100%二甲苯Ⅱ中进行透明,每种试剂中停留约10 min。(https://www.xing528.com)
(8)封藏 用中性树胶封片。
染色结果:华肝蛭内部结构被染成红色(图2-2)。
日本血吸虫(图2-3)、布氏姜片吸虫(图2-4)内部结构被染成深浅不同的红色。
图2-2 华肝蛭
图2-3 日本血吸虫(雌雄合抱)
图2-4 布氏姜片虫
(四)思考题
为什么固定之前要先麻醉并用两张载玻片夹紧虫体?
(五)实验报告
1.你的实验结果(贴图)
2.实验总结(心得与体会)
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