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制作吸虫整体切片的实验方法优化

时间:2026-01-23 理论教育 小霍霍 版权反馈
【摘要】:(二)材料日本血吸虫、华肝蛭、布氏姜片虫等。(三)操作步骤麻醉经过麻醉之后再固定,虫体不致收缩。撒几粒薄荷醇结晶到盛有华肝蛭的生理盐水表面,30 min后即可将华肝蛭麻醉。或者将华肝蛭放在水中静置数小时使虫体松弛。如发现虫体卷曲,可在移入70%乙醇后,把华肝蛭夹在两张载玻片之间稍压,展平后再继续脱水。图2-2华肝蛭图2-3日本血吸虫图2-4布氏姜片虫(四)思考题为什么固定之前要先麻醉并用两张载玻片夹紧虫体?

(一)用具与药品

培养皿、长方形玻璃板、载玻片、盖玻片、滴管、0.007 g/mL生理盐水、薄荷醇(menthol)、硼砂洋红染色液、1%酸乙醇、各浓度乙醇溶液、二甲苯、中性树胶。

(二)材料

日本血吸虫、华肝蛭、布氏姜片虫等。

(三)操作步骤(以华肝蛭为例)

(1)麻醉 经过麻醉之后再固定,虫体不致收缩。撒几粒薄荷醇结晶到盛有华肝蛭的生理盐水表面,30 min后即可将华肝蛭麻醉。或者将华肝蛭放在水中静置数小时使虫体松弛。

(2)固定 在一块长方形玻璃板上铺2~3层粗滤纸,使滤纸饱浸70%乙醇。迅速将华肝蛭从生理盐水中取出,平放在滤纸上。再以蘸有70%乙醇的滤纸盖在华肝蛭上面,上加玻板,玻板上压一些较重的东西。或将一条华肝蛭夹在两张载玻片之间,用线扎牢,放在70%乙醇中固定及压平。12 h后取下染色。

(3)染色 用硼砂洋红染色2~12 h。

(4)漂洗 用70%乙醇洗10 min。

(5)分化 经1%酸乙醇分化,直至内部结构能看清楚为止。

(6)脱水 经70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ进行梯度乙醇脱水,每种试剂中停留5 min。如发现虫体卷曲,可在移入70%乙醇后,把华肝蛭夹在两张载玻片之间稍压,展平后再继续脱水。

(7)透明 分别浸入50%二甲苯、100%二甲苯Ⅰ、100%二甲苯Ⅱ中进行透明,每种试剂中停留约10 min。(https://www.xing528.com)

(8)封藏 用中性树胶封片。

染色结果:华肝蛭内部结构被染成红色(图2-2)。

日本血吸虫(图2-3)、布氏姜片吸虫(图2-4)内部结构被染成深浅不同的红色。

图2-2 华肝蛭

图2-3 日本血吸虫(雌雄合抱)

图2-4 布氏姜片虫

(四)思考题

为什么固定之前要先麻醉并用两张载玻片夹紧虫体?

(五)实验报告

1.你的实验结果(贴图)

2.实验总结(心得与体会)

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