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平滑肌分离制片的实验方法

时间:2023-06-26 理论教育 版权反馈
【摘要】:若用针拨组织,肌纤维能够分离时,即可停止染色。分离用两支解剖针把材料充分撕散,将离散的材料连同蒸馏水一并倒在一小广口瓶中,塞紧瓶盖,用力来回摇动小广口瓶,使材料更分离。把小广口瓶中含有平滑肌纤维的蒸馏水迅速倒入另一瓶中,待其沉淀至瓶底后,再把蒸馏水全部吸出。然后将一小滴带有平滑肌纤维的树胶滴于载玻片中央,加盖玻片进行封藏。

平滑肌分离制片的实验方法

(一)用具与药品

离心机、解剖剪、解剖针、吸管、玻皿、小广口瓶、载玻片、盖玻片、FAA液(固定液)、锂洋红染色液、1%醋酸、各级乙醇、冬青油、树胶。

(二)材料

蛙或蟾蜍的胃。

(三)操作步骤

(1)固定 将一块蛙胃固定于FAA液中24 h以上。

(2)修整与洗涤 将材料剪成长4~5 mm的小段,用50%乙醇、30%乙醇及蒸馏水各浸泡4~5 h。多换几次蒸馏水。

(3)染色 用锂洋红染色液在室温下染色15~30 d。在50~60 ℃的温箱中染色7 d左右。其间需经常检查材料的软硬程度。若用针拨组织,肌纤维能够分离时,即可停止染色。

(4)固色 用1%醋酸水溶液固定染料5 min,蒸馏水洗数次,以去除醋酸。

(5)分离 用两支解剖针把材料充分撕散,将离散的材料连同蒸馏水一并倒在一小广口瓶中,塞紧瓶盖,用力来回摇动小广口瓶,使材料更分离。停止摇动后不久,已分离的平滑肌纤维较轻,来不及沉在瓶底而悬浮于蒸馏水中。把小广口瓶中含有平滑肌纤维的蒸馏水迅速倒入另一瓶中,待其沉淀至瓶底后,再把蒸馏水全部吸出。

(6)脱水 在70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ中各停留1 h。因为材料已分离,不易集中,容易丢失,故更换乙醇时需先用离心机进行离心,再小心地去除乙醇,这样才不会把材料浪费掉。(www.xing528.com)

(7)透明 在纯乙醇冬青油(体积比为1∶1)及纯冬青油中各浸l~4 h,使材料透明。更换液体前也需要先离心处理。

(8)封藏 用吸管吸取一小部分材料放在树胶内调匀。然后将一小滴带有平滑肌纤维的树胶滴于载玻片中央,加盖玻片进行封藏。

染色结果:平滑肌纤维粉红色,核红色(图2-18)。

图2-18 分离的平滑肌

(四)思考题

为什么材料分离之后的脱水和透明过程中均需要进行离心处理?

(五)实验报告

1.你的实验结果(贴图)

2.实验总结(心得与体会)

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