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电镜观察中常用的染色方法

时间:2023-06-26 理论教育 版权反馈
【摘要】:切片用甲醇配制的染液染色后需用两瓶50%甲醇水溶液各洗3~4次,再用两瓶双蒸水各洗3~4次。此染液pH为11~12,为常用的双重染色法的铅染色液。硝酸铅与柠檬酸钠充分摇荡至乳白色无颗粒状态是非常重要的,它影响染色性的强弱。

电镜观察中常用的染色方法

一、醋酸铀染色法

醋酸铀又称醋酸双氧铀,它可以与大多数细胞成分结合,特别容易与核糖核酸颗粒反应,因此对核蛋白染色较好。

一般常用40%或50%浓度的乙醇丙酮为溶剂。切片染色后用双蒸水冲洗15~20 s。或用4个瓶分装双蒸水,切片于每瓶洗3~4次,总时间不超过20 s。切片用甲醇配制的染液染色后需用两瓶50%甲醇水溶液各洗3~4次,再用两瓶双蒸水各洗3~4次。冲洗后的铜网用三角形滤纸从镊子中间把水吸干,再进行染色。

二、铅染色法

目前多用双重染色以增强反差。一般先进行醋酸铀染色后再实行铅染色。

1.Reynold法

(1)取硝酸铅1.33 g,柠檬酸钠1.76 g,加双蒸水30 mL,强烈摇荡20~30 min至完全溶解为乳白色混合液而没有颗粒时为止。然后加入1 mol/L氢氧化钠水溶液8 mL,又充分摇荡,最后加水至50 mL,保存于冰箱

(2)用(1)液染15~30 min。

(3)在0.02 mol/L氢氧化钠水溶液中洗15~20次。

(4)用冲洗瓶中的双蒸水冲洗约20 s,然后用三角形滤纸吸干。

此染液pH为11~12,为常用的双重染色法的铅染色液。配液时应选用分析纯试剂,配液用的双蒸水要新鲜或煮沸冷却后使用。硝酸铅与柠檬酸钠充分摇荡至乳白色无颗粒状态是非常重要的,它影响染色性的强弱。久置的铅液瓶底常出现沉淀、液面污染,影响切片。这种Reynold铅染液效果可靠稳定,用环氧树脂812包埋的切片染10~20 min,用环氧树脂618包埋的切片染30 min,均可获得较好效果。

2.Vemable-Coggeshall法(www.xing528.com)

(1)将0.02 g柠檬酸铅溶于10 mL双蒸水中,充分振荡至乳白色混浊液。

(2)加10 mol/L氢氧化钠0.1 mL于上液中摇荡,使柠檬酸铅完全溶解呈透明状,置冷暗处保存。

(3)切片在上液染数秒至5 min,双蒸水冲洗后干燥。若进行双重染色,先用醋酸铀甲醇溶液染4~5 min,铅液复染30~60 s。

3.Sato复染法

硝酸铅1 g,醋酸铅1 g,柠檬酸铅1 g,柠檬酸钠2 g。取双蒸水82 mL,加热至40~45℃,将上列铅试剂依次加入,摇荡1 min,然后加入柠檬酸钠再摇荡5 min;最后再加1 mol/L氢氧化钠溶液18 mL,边滴边搅拌至液体透明,经充分摇荡后过滤使用。此液pH为12。单染色染10 min,双重染色染5~7 min。

超薄切片在透射电子显微镜下观察,通常显示出来的是灰度图像(即由黑色、白色和各种不同程度的灰色构成的图像),即我们通常所称的黑白图像(图4-30~图4-33)。

图4-30 胭脂鱼粒细胞

图4-31 图4-30 的部分放大

图4-32 胭脂鱼的单核细胞

图4-33 图4-32 的部分放大

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