探究酵母菌形态与大小的实验技术

一、目的要求

（1）观察酵母菌的形态、生殖方式，熟练显微镜使用技术。

（2）了解测量微生物细胞大小的原理，掌握微生物细胞大小的测定技术。

二、基本原理

酵母菌是单细胞的真菌，细胞圆形、卵圆形或圆柱形，较细菌细胞大，在高倍镜下可观察其形态。芽殖是主要的无性繁殖方式。

由于微生物细胞较小，只能在显微镜下来测量。测量细胞大小的工具为测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺两块。镜台测微尺形如载玻片，在中央的圆形盖片下，有一条长为1mm的刻度，精确等分为100格，每格长10μm。目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分或把100mm刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上来测量经显微镜放大后的细胞物像，由于在显微镜不同的接目镜和接物镜系统下，放大倍数不同，目镜测微尺每格所示长度随显微镜放大倍数而变化。所以在使用前，需用镜台测微尺来校正，求出在显微镜某一接目镜和接物镜系统下，目镜测微尺一格所代表的实际长度。

三、实验材料

（1）菌种 酵母菌标本片。

（2）器材及试剂 啤酒酵母菌悬液、目镜测微尺、镜台测微尺、载玻片、盖玻片、试管以及镜检用物。

四、实验步骤

（一）酵母菌的形态观察

（1）酵母菌水浸标本片的制作 取一干净的载玻片，取菌悬液一滴于中央处，取一盖玻片，小心地将其一端与菌液接触，缓慢地放下，避免气泡的产生。

（2）镜检 在高倍镜下观察酵母菌的细胞形状和芽殖情况。(www.xing528.com)

（二）目镜测微尺的标定

（1）取下目镜，小心地装上目镜测微尺，使刻度向下；把镜台测微尺固定在载物台上，使有刻度的一面朝上。

（2）先用低倍镜观察，调节工作距离，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜测微尺，使两个测微尺的刻度线平行。使用推动器，先使两尺一端的“0”刻度完全重合，再寻找两尺的另一重合刻度线，分别数出两者的格数，并计算目镜测微尺每小格代表的实际长度。例如：若在两重合刻度线之间目镜测微尺为50格，镜台测微尺为10格，则此时目镜测微尺每小格代表的实际长度为2μm。

（3）同法校正在高倍镜下目镜测微尺每小格代表的实际长度。

（三）酵母菌细胞大小的测定

将酵母菌水浸片或酵母标本片置于载物台上，在高倍镜下找出物像清晰的酵母，数出酵母菌细胞在目镜测微尺中直径或长和宽各占几个小格，然后计算酵母菌实际大小。为减少误差，应在同一涂片上任意测定10～20个细胞。

五、实验报告

（1）图示镜检的酵母菌细胞形态。

（2）列出所测细胞的大小，并求平均值。

六、思考题

为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺校正？