快速检测肉毒素的方法和技术

任务引入案例

网约美容师打肉毒素 这姑娘命差点没了

2017年3月12日晚10点左右，市中医医院急诊科来的这位女患者让医生也吓了一跳。患者30岁出头，有头晕、恶心、呕吐、胸闷、心悸、气短、周身乏力、视物成双、意识模糊等诸多症状，最显眼的是她脸上的多个像圆珠笔点的小点，再一测心率，已经达到每分钟150次，十分危险。原来小美刚刚打了4针肉毒素。肉毒素就是肉毒杆菌毒素的俗称，是肉毒杆菌在繁殖过程中分泌的毒性蛋白质，具有很强的神经毒性，能破坏生物的神经系统，使人出现头晕、呼吸困难、肌肉乏力等症状，最早是作为生化武器使用，后来被医学界用来治疗面部痉挛和其他肌肉运动紊乱症。后来人们又发现肉毒素可以消除皱纹，这才被美容行业广泛使用。患者、过敏体质者以及身体非常瘦弱，有心、肝、肾等内脏疾病的人等都是不能使用的。另外，肉毒素用于美容也会出现一些危害，比如皮肤潮红、瘙痒，复视，表情不自然，畏光流泪甚至全身中毒，如胸闷、心悸、乏力、发热、吞咽困难等，小美就是典型的肉毒菌中毒患者，而严重过敏或超剂量使用甚至可以导致死亡。

任务介绍

肉毒梭状芽孢杆菌（Clostridium botulinum）简称肉毒梭菌或肉毒杆菌，为革兰氏阳性厌氧菌。在厌氧环境中能产生外毒素，即为肉毒梭菌毒素，简称肉毒毒素（botulinum toxlin）。肉毒毒素与典型的外毒素不同，并非由活的细菌释放，而是在细菌细胞内产生无毒的前体毒素，待细菌死亡自溶后游离出来，经肠道中的胰蛋白酶或细菌产生的蛋白酶激活后才具有毒性，且能抵抗胃酸和消化酶的破坏。

肉毒毒素是已知最剧烈的毒物，毒性比氰化钾强一万倍。肉毒梭菌食物中毒是神经毒素型食物中毒。肉毒毒素由胃肠道吸收后，经淋巴和血进行扩散，作用于颅脑神经核和外周神经肌肉接头以及植物神经末梢，阻碍乙酰胆碱（神经传导介质）释放，影响神经冲动的传递，导致肌肉的松弛性麻痹。

肉毒杆菌在自然界分布广泛，土壤中常可检出，偶亦存在于动物粪便。我国引起肉毒毒素中毒的食品是家庭自制的发酵食品，如：豆瓣酱、豆酱、豆豉、臭豆腐等。也有少数发生于各种不新鲜肉、蛋、鱼类食品。日本以鱼制品引起中毒较多。欧美多以肉制品引起中毒较多。

肉毒毒素的快速检测主要是胶体金法。

任务实操

豆瓣酱中肉毒毒素的免疫胶体快速检测

1. 适用范围

本方法适用于肉类、豆制品、腌制的菜、酱、蜂蜜、奶液等 A 型肉毒素的检出。

2. 检测原理

采用双抗体夹心法（图3-5），将抗A 型肉毒素特异性抗体包被在硝酸纤维膜上，用于捕捉标本中的A 型肉毒素，然后用特异性抗体标记的免疫胶体金探针进行检测。检测时，待测样品中的肉毒素与试纸条上的金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，并与膜上的抗体结合形成肉眼可视红色带。

图3-5 双抗夹心法

3. 操作步骤(www.xing528.com)

（1）固态食品如肉类、豆制品、腌制的菜、酱等，称取约2g，充分剪碎，加5mL生理盐水振荡10min，使内容物充分浸出，自然沉降后取上清液0.3mL作为样品检测液；液体食品如蜂蜜、奶液等，吸取0.1mL，加生理盐水0.4mL，混匀后作为样品检测液。

（2）取试剂一个，撕开外包装，吸取样品检测液，滴加3～4滴（约0.2mL）于试剂圆孔中，2min后观察结果，15min终止观察。

4. 结果判定

（1）阳性结果 试剂窗口“C”和“T”（对照和检测）处出现2条红色沉淀线为阳性，即有肉毒素检出。

（2）阴性结果 试剂窗口“C”（对照）处出现1条红色沉淀线为阴性，即无肉毒素检出。

（3）试剂失败 试剂窗口“C”和“T”（对照和检测）均无红色沉淀线，即试剂失败。

5. 注意事项

避免假阳性结果出现。

任务拓展

肉毒素分类。

拓展

复习思考题

1. 什么是肉毒素，检测方法是什么？

2. 什么是龙葵碱，龙葵碱危害有哪些？

3. 黄曲霉毒素的分类及毒性，快速检测方法是什么？