1.玻璃器皿的洗涤
微生物学试验中，常用的玻璃器皿、三角烧瓶、试管、吸管等洗涤是否干净，灭菌是否彻底，对试验结果的正确性有直接的影响。洗涤后的器皿应达到玻璃壁能被水均匀湿润而无条纹和水珠。
（1）新玻璃器皿的洗涤 新玻璃器皿常略带碱性，使用前应先用1%～2%盐酸水溶液（体积分数）浸泡数小时或过夜，再用洗衣粉或洗洁精洗涤，然后用清水洗净，必要时再用蒸馏水冲洗，倒立于晾干架上或烘干。
（2）一般玻璃器皿的洗涤 一般器皿用完后，立即用洗洁精浸泡，用毛刷刷洗，并用清水冲净。如粘污有细菌培养物的器皿应进行高压灭菌后再刷洗。灭菌前不能任意堆放。
（3）难洗器皿的洗涤 难洗的器皿不要与易洗涤的器皿混在一起。有油的器皿不要与无油的器皿混在一起，否则使本来无油的器皿也沾上油垢，浪费洗涤剂和洗涤时间。
2.器皿的包扎
为了使灭菌后仍保持无菌状态，各种玻璃器皿均需包扎。
（1）培养皿 洗涤烘干后的培养皿每5～8套作为一包，用牢固的纸卷成一筒，外面用绳子捆扎，以免散开，然后进行灭菌。至使用时才能在无菌室中打开取出。
（2）吸管 洗净烘干后的吸管，在吸管的粗头顶端用尖头镊子或针塞入少许脱脂棉花，约1.5cm长，以防止菌体误吸入口中及口中的微生物吹入吸管而进入培养物中造成污染。塞入棉花的量要适宜，棉花不宜露在吸管外面，多余的棉花可用酒精灯的火焰把它烧掉。每支吸管用一条宽4～5cm的纸条，以45°左右的角度螺旋形卷起来，如图1-12所示。吸管的尖端在头部，吸管的另一端用剩余的纸条折叠打结以免散开，标上容量。灭菌后，要在使用时才从吸管中间拧断纸条抽取吸管，或用双层白棉布做成长度适宜的袋子，若干支吸管装为一袋，吸管的尖端在布袋的封口处，吸口在袋口处，装好后将袋口扎紧，灭菌。
注意：布袋装吸管时不宜用干热灭菌法灭菌。
（3）试管和三角烧瓶 试管要用合适的棉花塞，棉花塞起过滤作用，避免空气中的微生物进入试管。棉花塞的制作过程如图1-13所示，要求使棉花塞紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，不能过紧也不能过松。过紧易挤破管口和不易塞入，过松易掉落和污染。棉花塞的长度不小于管口直径的两倍，约2/3塞进管中，如图1-14所示。
若干支试管用绳扎在一起，在棉花塞部分用牛皮纸包裹，在纸外用绳扎紧后灭菌，如图1-15所示。每个三角瓶用双层牛皮纸将瓶口包裹然后用棉绳扎紧。
图1-12 用纸条包扎吸管
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图1-13 棉花塞的制作过程
3.无菌操作的基本原则
1）无菌室应经常打扫，用来苏水擦洗桌面、台面及墙壁。无菌室在使用前，用紫外线灯照射30min进行空气消毒。
2）进入无菌室前先洗手，在缓冲间内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、工作帽、口罩及工作鞋。工作鞋只准在无菌室内使用，不准穿到其他地方去。
3）样品及无菌物打开后，操作者在操作时应与样品及无菌物保持一定距离；未经消毒的手及物品不可直接接触样品及无菌物品；样品及无菌物不可在空气中暴露过久，操作要正确、迅速；取样时必须用无菌钳或无菌镊子，手臂不可从样品及无菌物面上横过；从无菌容器中或样品中取出的物品即使未被污染，也不能放回原处。
4）无菌物品应分类放置于固定地点，并定期检查，不可与未灭菌的物品混放在一起。
5）不能在无菌室内谈笑，尽量少走动。
6）无菌室应定时熏蒸灭菌。
图1-14 棉花塞的长度
a）正确 b）、c）不正确
图1-15 用牛皮纸包裹
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