Y-DNA检测在刑事侦查中的应用取得突破

YCA的重复单位均为CA，YCAⅠ在欧洲白人中发现3个等位基因，长度为124～132 bp，GD值为0.10。YCAⅡ发现有28个等位基因，长度为147～165 bp，GD值为0.67，突变率0.123%，是一个多复制标识点，包括YCAⅡa和YCAⅡb两个片段。

YCA重复单位为2个碱基，所以Stutter带较多，较重，结果判断时应慎重。2 bp长度的Y-STR因为电泳时产生的Stutter带很重，会干扰分型，近来已被淘汰不用。Prinz等报道，在检验Y-STR时用Gold Taq酶代替Taq酶，Stutter带可以减轻或消失。

YCAⅠ参考引物序列：①5'-CCCATGCCTGTTCTCCAGATT-3'；②5'-GAGAGTGTGACACATCAGGTA-3'。

YCAⅡ参考引物序列：①5'-TATATTAAATAGAAGTAGTGA-3'；②5'-TATCGATGTAATGTTATATTA-3'。

PCR反应体系（50μL）：1UTaq聚合酶，0.1～0.8μmol/L每引（第一个引物用荧光物质标记），200μmol/L每dNTPs，1.5 mmol/LMgCl2，50 mmol/LKCl，10 mmol/LTris-HCl（pH8.3）。

PCR扩增条件：（YCAⅠ、YCAⅢ）94℃3 min，94℃60 s，55℃60 s，72℃90 s，30个循环。（YCAⅡ）94℃3 min，94℃60 s，45℃60 s，72℃90 s，30个循环。(www.xing528.com)

1999年，Matsumoto等采用PAGE-EB染色法检测YCAⅡ，方法如下：

PCR反应体系（100μL）：100 ngDNA，2.5 IUTaq酶，10 mmol/LTris-HCl（pH8.3），16.5 mmol/L（NH4）2SO3，10 mg L/mLBSA，200μmol/L每dNTPs，2 mmol/LMgCl2，0.5μmol/L每引。

PCR扩增条件：（YCAⅡ）94℃1 min，55℃1 min，72℃1 min，30个循环。

检测：8%变性或非变性PAGE，槽胶Buffer均为TBE，500 V，4 h，EB染色。上样前PCR产物用Microcon-100处理。