浙江杭州清代胡雪岩祖父遗骸确认，Y-DNA检测助刑事侦查

2008年12月，浙江省杭州市龙井山顶发现1座古墓，墓前碑文显示应系清代红顶商人胡雪岩（1823—1885）祖父胡国梁与其妻子的墓穴。墓中发现2具遗骸。因墓穴被盗，2具遗骸破坏严重，杭州市文物考古研究所委托杭州市公安局刑事科学研究所，将墓中遗骨和胡雪岩旁系后裔DNA做了检验对比。墓主人DNA经过测试，为N单倍群。根据测试结果，浙江胡雪岩旁系后代Y-DNA与古DNA样本完全一致。

法医学实践中经常遇到对骨骼DNA检验的案例，但对保存超过100年的骨骼样本的检验报道较少。法医提取到150年前土埋遗骸的骨DNA，采用Yfiler试剂盒在9700型扩增仪上进行扩增，3130XL型遗传分析仪进行检测，得到遗骸Y-STR分型，并与对照样本对比，确认了遗骸身份。

2具遗骸各取长骨1段，用手术刀刮净骨骼表面色素及污垢，蒸馏水充分清洗表面及骨髓腔，晾干后紫外灯照射1 h左右。用液氮冷冻，用研磨器将骨骼研磨成粉末状。

DNA提取：取约3 g骨粉置于15 mL离心管中，加入10 mLEDTA脱钙液（pH8.0）充分震荡混匀，56℃脱钙48 h，其间每12 h更换1次脱钙液。离心，弃上清液，分别加入2 mL骨孵液（Promega，USA）、适量蛋白酶K（10 mg/mL）及DTT（1 mol/L），56℃水浴36 h，其间追加1次等量蛋白酶K及DTT。消化完成后，离心将上清液转移至另一洁净15 mL离心管，加入2倍体积Lysis Buffer（Promega，USA）、15%磁珠悬液60μL，充分混匀。室温静置30 min（每10 min震荡1次），70%冷乙醇漂洗2次，56℃快速挥干残余乙醇后加入20μLElution Buffer（Promega，USA）洗脱DNA。(www.xing528.com)

DNA定量：提取的模板DNA采用QuantifilerTMHuman DNA Quantfication试剂盒（AB，USA），使用AB7500型PCR仪进行定量。结果可疑男性遗骸模板DNA浓度为0.13 ng/mL，可疑女性遗骸模板DNA浓度未检出。

STR检验：对可疑为男性的模板DNA采用Y-Filer试剂盒（AB，USA）依照推荐扩增程序，在AB9700型扩增仪上进行复合扩增，使用AB3130XL型遗传分析仪检测。Y-STR所有基因座均扩增成功，与胡氏后代样本对比，结果完全一致。本文出土遗骨与对照样本间隔五代，Y-STR分型完全一致，为考古研究提供了有力证据。

汉族胡姓最早得姓于西周的诸侯国，是主要来源。但在漫长的历史中，一些外来少数民族也融入汉族，由于当时被称为胡人，即长着大胡须的人，于是以胡为姓。胡雪岩家族的DNA单倍群为N，主要高频出现于阿尔泰与乌拉尔语系民族。但由于历史上融入汉族的历史，使他们对汉族身份高度认同。而汉族的Y染色体单倍群主体其实为O-M175（占总人口75%）及C-M130（占总人口5%～10%）。