高中生物核心知识：DNA粗提取与鉴定

1.实验原理

（1）DNA不溶于酒精，某些蛋白质溶于酒精。

（2）DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2 mol/L的NaCl溶液。

（3）在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。

2.实验步骤

（1）取材、研磨：称取30 g洋葱，切碎，然后放入研钵中，加入10 mL研磨液，充分研磨。

（2）过滤：漏斗中垫纱布，将研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液（或直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1500 r/min的转速下离心5 min，再取上清液）。

（3）分离：在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液（体积分数为95%），静止2～3 min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿同一方向搅拌，卷起丝状物（粗提取的DNA），并用滤纸吸去水分[或用离心法取沉淀物：将溶液倒入塑料离心管中，在10000 r/min的转速下离心5 min，弃上清液，将管底的沉淀物（粗提取的DNA）晾干]。

（4）鉴定：取两支20 mL的试管编号为A、B，各加入2 mol/L的NaCl溶液5 mL，将丝状物（或沉淀物）溶于B试管的NaCl溶液中。然后向两支试管中各加入4 mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min。(www.xing528.com)

（5）观察实验结果：A试管不变蓝，B试管变蓝色。

温馨提示

①材料的选择：富含DNA的材料（哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核和细胞器，因此不能选哺乳动物的血液来提取DNA）。

②研磨液的成分：洗涤剂和食盐。洗涤剂溶解细胞膜、核膜，释放出细胞内含物；食盐加速染色体的核蛋白解聚，游离出DNA分子，并使DNA分子充分溶解于NaCl溶液中。

③酒精冷却的目的：低温可以降低DNA酶的活性，抑制DNA的降解。

④用玻璃棒沿一个方向搅拌，防止DNA发生断裂，使其能完整地缠在玻璃棒上。

⑤粗提取的DNA中可能还含有RNA、脂质和少量蛋白质等杂质。

⑥为保证实验效果，二苯胺试剂要现配现用。