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克隆植物凤眼莲基因组DNA提取方法研究

时间:2023-10-18 理论教育 版权反馈
【摘要】:本研究参照Xie等的干燥材料小量CTAB提取方法。向1.5mL的离心管中加入600μL 60℃预热的CTAB提取缓冲液,混匀并于60℃水浴60min。取出溶液,10000rpm离心3min,下有白色沉淀,即为DNA。取上清,加入1/10体积的NaAc,加入等体积的冰冻的异丙醇,放入冰箱-20℃约30min。10000rpm离心3min,弃上清,用70%酒精500μL洗涤两次,无水乙醇洗涤一次,烘箱中烘干乙醇或自然晾干。

克隆植物凤眼莲基因组DNA提取方法研究

本研究参照Xie等(2002)的干燥材料小量CTAB提取方法。具体如下:

(1)取0.1g的硅胶干燥叶片,用液氮充分研磨,迅速分装于1.5mL的离心管中。

(2)向1.5mL的离心管中加入600μL 60℃预热的CTAB提取缓冲液(含0.5%β-巯基乙醇),混匀并于60℃水浴60min(中间摇匀数次)。

(3)加入等体积的氯仿-异戊醇(24∶1),轻轻摇动60min。

(4)8000rpm 4℃离心10min,取上清。

(5)加入等体积的冰冷的异丙醇(沉淀DNA),在-20℃放置30min。

(6)取出溶液,10000rpm离心3min,下有白色沉淀,即为DNA。(www.xing528.com)

(7)倒出溶液,用500μL70%酒精洗涤白色沉淀两次,500μL无水乙醇洗涤一次,在37℃烘箱烘干乙醇或自然晾干。

(8)用200μL TE溶解DNA,60℃水浴(溶解DNA),加RNA酶20μL,37℃水浴保温1h,以除去RNA.

(9)加等体积氯仿-异戊醇(24∶1),摇匀分层。10000rpm离心10min。

(10)取上清,加入1/10体积的NaAc,加入等体积(约400μL)的冰冻的异丙醇,放入冰箱-20℃约30min。

(11)10000rpm离心3min,弃上清,用70%酒精500μL洗涤两次,无水乙醇洗涤一次,烘箱中烘干乙醇或自然晾干。

(12)加TE溶解,-20℃保存待用。

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