高等有机实验：重结晶与分步结晶

由于在以上步骤得到的结晶一般含有其他杂质，为了得到更纯净的化合物晶体，有必要进行重结晶和分步结晶的实验操作。重结晶的主要操作是把晶体用少量溶剂体系重新加热溶解制成过饱和溶液，趁热迅速过滤后缓慢冷却结晶。

分步结晶的原理是利用不同的化学成分形成晶体的条件不同，粗晶体中不同成分的含量不同，它们析出晶体的时间也不同，因此可以通过分步结晶进一步纯化目标化合物。具体操作是在析出第一批结晶后，浓缩母液，在逐渐降低温度的条件下放置得到第二批结晶，然后立即把这部分结晶分离开。重复操作直到所有的物质都析出晶体时停止操作。本操作要注意不同批次的结晶可能纯度不同，化合物的成分也不一样，故所有结晶必须经过薄层色谱或高效液相色谱仪等手段检测确定是相同的化合物后才能合并。

薄层色谱检测法简单、快速、价廉，是验证化合物是否相同的基本方法，该方法是把可疑化合物同时点在薄层色谱板上，使用三种以上不同的展开系统展开后显色观察，如果这些化合物显示出多个点，则一定不是纯净的化合物；若它们的颜色、比移值有差异，则它们一定不是相同的化合物；如果它们的颜色和比移值相同，则可能是相同的化合物（见第三章中薄层色谱对于化合物鉴定的描述）。要注意薄层色谱比移值和颜色相同的化合物也可能不是同一个化合物，比如各种同分异构体、光学异构体等在薄层色谱上很难分辨，为确保得到准确的结果，需要进一步使用高效液相色谱仪等手段检测。(https://www.xing528.com)

在高效液相色谱仪中，若样品有一个以上的吸收峰，则样品一定不纯；若样品在相同的色谱柱中、相同的洗脱剂和流速的条件下的保留时间不一致，则它们一定不是同一个化合物；若更换不同的色谱柱、不同的洗脱剂、不同的流速和温度检测后发现这些化合物的保留时间一致而且都只有一个吸收峰，那么可以确定这些化合物都是纯净的，而且是相同的化合物，可以合并。