首页 理论教育 实验三:酶活性受激活剂和抑制剂影响

实验三:酶活性受激活剂和抑制剂影响

时间:2023-10-22 理论教育 版权反馈
【摘要】:并观察激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。

实验三:酶活性受激活剂和抑制剂影响

【目的】 通过唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖水解作用,验证酶的专一性。并观察激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。

【原理】

1.酶作用专一性 唾液淀粉酶对淀粉有水解作用,生成麦芽糖和少量葡萄糖,两者均属于还原性糖,能使班氏试剂中的Cu2+还原成Cu+,生成砖红色Cu2O沉淀。蔗糖不能被淀粉酶水解,且蔗糖本身又无还原性,故不能使班氏试剂还原而产生颜色反应。

2.激活剂、抑制剂对酶活性的影响 唾液淀粉酶对淀粉有水解作用,因酶的活性不同可产生不同的水解产物,其与碘液的呈色反应不一样。据此来观察激活剂、抑制剂对酶活性的影响。唾液淀粉酶对淀粉的水解过程如下:

淀粉→蓝色糊精→红色糊精→无色糊精→麦芽糖+少量葡萄糖

遇碘呈色反应:蓝色  蓝色   红色   无色    无色

中间可出现其他过渡色,如蓝紫色、棕红色等。

【器材】 恒温水浴箱、试管、试管架、滴管、沸水浴、烧杯等。

【试剂】

(1)10 g/L淀粉溶液:取可溶性淀粉1 g,加5ml蒸馏水,调成糊状再加蒸馏水80ml,加热使其溶解,最后用蒸馏水稀释至100ml。冰箱保存。

(2)10 g/L蔗糖溶液。

(3)pH6.8PBS缓冲液:取磷酸氢二钠477mg,磷酸二氢钠397mg,蒸馏水溶解至100ml。

(4)班氏试剂:结晶硫酸铜(CuSO4·5H2O)17.3g溶于100ml热的蒸馏水中,冷却后稀释至150ml,此即第一液。将枸橼酸钠173g和无水碳酸钠100g加水600ml,加热使之溶解,冷却后稀释至800ml,此即第二液。将第一液慢慢倒入第二液中,混匀后即为班氏试剂。

(5)1%NaCl溶液。(www.xing528.com)

(6)l%CuS04溶液。

(7)1%Na2S04溶液。

(8)稀碘液。

(9)稀释新鲜唾液:用水漱洗口腔以除去食物残渣,再含约30ml的蒸馏水作咀嚼运动,促进唾液分泌,2min后收集并以棉花过滤于烧杯中备用。

(10)煮沸唾液:取上述稀释唾液约一半于另一烧杯中,放沸水中煮沸5min,使唾液淀粉酶变性失活。

【操作】

1.酶作用专一性

(1)取3支试管按下表操作:

(2)观察各管的变化,记录并分析结果。

2.激活剂、抑制剂对酶促反应的影响

(1)取4支试管按下表操作:

(2)观察各管颜色的区别,说明激活剂、抑制剂对酶活性的影响。

免责声明:以上内容源自网络,版权归原作者所有,如有侵犯您的原创版权请告知,我们将尽快删除相关内容。

我要反馈