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肝脏生成酮体实验结论

时间:2023-10-22 理论教育 版权反馈
【摘要】:了解组织匀浆的制备方法,通过实验证明肝中酮体生成作用。肝细胞中含有酮体生成酶系,故能生成酮体,酮体中的乙酰乙酸及丙酮可与含硝普钠的显色粉反应产生紫红色化合物。洛克溶液:取氯化钠0.9g、氯化钾0.042g、氯化钙0.024g、碳酸氢钠0.02g、葡萄糖0.1 g放入烧杯中,加蒸馏水溶解后,加水至100ml,置冰箱中备用。15%三氯醋酸溶液。

肝脏生成酮体实验结论

【目的】 了解组织匀浆的制备方法,通过实验证明肝中酮体生成作用。

【原理】 以丁酸为底物,将丁酸溶液分别与肝匀浆和肌匀浆保温。肝细胞中含有酮体生成酶系,故能生成酮体,酮体中的乙酰乙酸丙酮可与含硝普钠(亚硝基铁氰化钠)的显色粉反应产生紫红色化合物。肌肉中没有生成酮体的酶系,同样处理的肌匀浆则不产生酮体,因此不能与显色粉产生颜色反应。

【器材】 匀浆机、研钵、恒温水浴箱、离心机、剪刀、白瓷反应板、试管、滴管及试管架等。

试剂

(1)0.9%氯化钠溶液。

(2)洛克溶液:取氯化钠0.9g、氯化钾0.042g、氯化钙0.024g、碳酸氢钠0.02g、葡萄糖0.1 g放入烧杯中,加蒸馏水溶解后,加水至100ml,置冰箱中备用。

(3)0.5mol/L丁酸溶液:取44.0 g丁酸溶于0.1mol/LNaOH溶液中,加0.1mol/LNaOH溶液至1 000ml。

(4)0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.6):准确称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·2H2O)7.74 g和磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)0.897 g,用蒸馏水稀释至500ml,准确测定pH值。

(5)15%三氯醋酸溶液。

(6)显色粉:硝普钠1 g,无水碳酸钠30 g,硫酸铵50 g,混合后研碎。(www.xing528.com)

【操作】

(1)肝匀浆和肌匀浆的制备:取小鼠1只,断头处死,迅速剖腹,取出肝和肌组织,剪碎,分别放入匀浆器或研钵中,加入生理盐水(重量:体积为1∶3),研磨成匀浆。

(2)取4支试管,编号后按下表操作:

(3)将上列4支试管摇匀后放37℃恒温水浴中保温30min。

(4)取出各管,每管加入15%三氯醋酸20滴,摇匀,离心5min(3 000 r/min)。

(5)分别于各管取离心液滴于有凹白瓷反应板中,每凹放入显色粉一小匙(约0.1 g),观察并记录每凹所产生的颜色反应。

【结果观察】 观察各管颜色变化,并说明原因。

【思考题】 何谓酮体?酮体何处生成?何处利用?酮体生成利用有何意义?

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