脲酶测定尿素氮-波氏比色法、正常人体功能

【目的】 了解脲酶-波氏比色法测定血清尿素氮的原理、操作方法及临床意义。

【原理】 脲酶水解尿素生成2分子氨和1分子二氧化碳，氨在碱性环境中与苯酚及次氯酸盐作用生成蓝色的吲哚酚，硝普钠催化此反应。蓝色吲哚酚生成量与尿素氮的含量成正比，在630 nm波长处有吸收峰。

【器材】 试管及试架、吸量管、水浴箱、722分光光度计。

【试剂】

1.酚显色剂　苯酚10 g，硝普钠（含2分子水）0.05 g，溶于1 000ml无氨去离子水中，4℃冰箱存放可保存2个月。

2.碱性次氯酸钠溶液　氢氧化钠5 g溶于无氨去离子水中，加“安替福明”8ml（相当于次氯酸钠0.42 g），再加无氨去离子水至1 000ml，置棕色瓶内，4℃冰箱可稳定2个月。

3.脲酶储存液　脲酶（比活性3 000～4 000单位/g）0.2 g置于20ml50％（V/V）甘油中，4℃冰箱可保存6个月。(www.xing528.com)

4.脲酶应用液　脲酶贮存液1ml，加10 g/LEDTA-Na2溶液（pH 6.5）至100ml，4℃冰箱可保存4个月。

5.14mmol/L尿素氮标准液　称取干燥纯尿素42.0mg，溶于少量无氨去离子水中，移入容量瓶，再加无氨去离子水稀释至100ml，加0.1 g叠氮钠或氯仿数滴防腐，4℃冰箱可保存6个月。

【操作】

（1）取3支16mm×10mm试管，按下表进行操作：

混匀，置于37℃水浴中，保温20min，用分光光度计波长630 nm比色，以空白管调零，分别读取测定管吸光度Au及标准管吸光度As。

（2）计算：血清尿素氮（mmol/L）=Au/As×14。