《植物生理研究技术》详解细胞生理研究方法

细胞生理的研究方法据目的不同主要有如下一些:

1.细胞形态结构的观察

可用光学显微镜技术(体视、光镜、偏光、相差、微分干涉差、荧光、暗场、激光共聚焦显微镜、显微摄影)以及电子显微镜技术(透射电镜、扫描电镜、扫描隧道效应显微镜)等。

2.细胞化学的方法

各种生物制片技术(徒手切片、整体装片、涂片、压片、冰冻切片、滑动切片、石蜡切片)、超薄切片的制备(电镜制片技术)、电镜负染方法、冷冻断裂电镜技术、金属投影电镜技术等。

细胞内各种结构和组分的细胞化学显示方法,如核酸、蛋白质、酶、多糖、脂类等的特异染色方法,线粒体、溶酶体、叶绿体及细胞核等细胞器的染色方法。

定性和定量的细胞化学分析技术方法,如:显微分光光度计、流式细胞技术等。

3.细胞组分的生化分离分析的方法(www.xing528.com)

包括差速离心和密度梯度离心,层析技术(纸层析、聚酰胺薄膜层析、纤维素柱层析), 电泳技术(琼脂糖凝胶电泳、PAGE、双向电泳),分子杂交技术(原位杂交、Southern杂交、Northern杂交)等。

4.标记与示踪技术

如同位素标记的放射自显影技术,免疫荧光抗体技术,酶联免疫反应和酶标技术,胶体金、胶体金银标记技术。

5.细胞生物工程技术

如细胞工程技术(细胞培养、细胞融合、细胞克隆、单克隆抗体、细胞突变体的筛选),染色体工程技术(染色体标本制备、染色体显带、染色体倍性改造)等。

采用传统的细胞研究方法,可对植物的生长发育进行观察,如对植物花粉、胚珠、果实发育的观察,对玉米单倍体的体细胞和性细胞进行染色体行为观察和计数等。植物细胞培养是植物细胞工程和植物基因工程的基础,在研究细胞生长、分化、细胞信号转导、细胞凋亡等理论问题和遗传育种、转基因植物等应用方面都不可或缺。

对细胞内各种细胞器的结构和功能的研究使人们在亚细胞水平解释植物的生命活动现象方面进入了新的阶段。对各种植物生物膜结构所执行的电子传递、能量转换、离子吸收、信号转导等生理功能的研究也取得了许多重要成就。