细菌保存法及存放时限-《分子生物学实验》

细菌可用穿刺保存法存放2年之久，或用冷冻保存法可无限期存放。

1.穿刺保存

使用容量为2～3mL并带有螺口旋盖和橡皮垫圈的玻璃小瓶，加入相当于2/3容量的熔化LB琼脂，旋上盖子，但并不拧紧，在1.034×105 Pa高压下蒸汽灭菌20min。从高压蒸汽灭菌器中取出玻璃小瓶，冷却至室温后拧紧盖子。放室温保存备用。

保存细菌时，用灭菌的接种针挑取长势良好的单菌落，把针穿过琼脂直达瓶底数次，盖上瓶盖并拧紧，在瓶身和瓶盖上均做好标记，4℃保存（更广为接受的做法是将瓶盖旋松，在适当温度下培养过夜，然后拧紧瓶盖并加封Parafilm膜，最好于4℃或于室温避光保存）。(www.xing528.com)

2.冷冻保存

在液体培养基中生长的细菌培养物的保存：取0.85mL细菌培养物，加入0.15mL灭菌甘油（甘油应在1.034×105 Pa高压下蒸汽灭菌20min）振荡培养物使甘油分布均匀，然后转移至标记好的、带有螺口旋盖和空气密封圈的保存管内，保存于-20℃条件下。如条件允许，可保存于-40℃或-70℃条件下，效果更好。复苏菌种时，用灭菌的接种针刮拭冻结的培养物表面，然后立即把黏附在接种针上的细菌划于含适当抗生素的LB琼脂平板表面，冻干保存的菌种管重置于-70℃条件下，而琼脂平板于37℃培养过夜。

在琼脂平板上生长的细菌培养物的保存：从琼脂平板表面刮下细菌放入装有2mL LB的无菌试管内，再加入等量的含有30%灭菌甘油的LB培养基，振荡混合物使甘油完全分布均匀后，分装于带有螺口盖和空气密封圈的无菌保存管中，按上述方法冰冻保存。