色谱系统在仪器分析中的关键要求

1.色谱系统适用性试验

《中国药典》规定，对色谱系统进行适用性试验，是分析测试的基本要求。只有通过适用性试验并达到规定的要求，方可进行样品的分析测试。如HPLC系统适用性试验，除另外有规定外，应符合下列要求：①色谱柱理论塔板数，应符合分析要求；②分离度，待测物与相邻共存物之间的分离度≥1.5；③重复性，峰面积测量值的相对偏差不大于2.0%；④拖尾因子，采用峰高法定量时，T应在0.95～1.05。

色谱柱的理论塔板数N要求在选定的条件下测定，记录色谱图后计算。如果测得的理论塔板数低于规定指标，需采用对色谱柱进行再生后在测试，使其达到规定要求，否则只能更换新色谱柱再试验，以达到规定要求为目的。

2.色谱柱的峰容量

色谱柱的峰容量也是色谱柱的一个重要性能指标，它是指在一定色谱条件下，色谱柱能够容纳达到基线分离的谱峰数量。形象地说，就是从出第一个峰起，一个接一个、没有间隔地排满彼此达到基线分离的峰，直到出完最后一个峰，这些峰的总数就是色谱柱的峰容量。

可以粗略估测一根色谱柱理论塔板数为N的峰容量：假设所有色谱峰宽相同，均为W，最后一个峰的保留时间为tR，所有相邻峰之间刚好基线分离，则其峰容量为S=tR/W，依据式（7-26），则有S=。很显然，实际的峰容量比这个数要小。一是不可能从进样开始就出峰，二是相邻峰之间不可能没有间隔，三是前面出来的峰宽窄，后面出来的峰宽变宽。经过进一步推导，最大峰容量可表达为

式中，tmax和tmin为最后一个和最先一个出峰的保留时间，它们均与保留因子密切相关。(www.xing528.com)

峰容量与固定相、填料粒径、柱内径和溶质的保留因子等有关，是色谱柱综合性能的评价指标。峰容量首先是柱本身的质量指标，同样条件下，柱效高峰容量也高；柱内径大的色谱柱，其相对峰容量也会较高。峰容量还与色谱柱对溶质可容纳的最大量相关，进样量过大，将可能导致柱超负荷，溶质不能在两相间达到有效平衡，发生严重拖尾导致较差的分离效果。

3.分离时间及影响因素

在建立和优化色谱过程中，完成色谱过程所需要的时间也是应考虑的因素。一个过程所需要的时间，取决于保留最强的组分，也是移行速率最慢的组分。根据式（7-12）、（7-25）和（7-33），可推导出

式中，tR,2为最后出柱组分的保留时间；um为流动相平均线流速，cm/s。

式（7-36）说明，在满足分离度要求的情况下，影响分离时间的因素还包括组分的保留因子、分离因子、塔板高度（柱效）及流动相线流速等。在其它条件不变的情况下，分离度增加1倍，分析时间将是原来的4倍；流动相流速增加1倍或塔板高度减小一半（柱效增加1倍），分析时间将降为原来的1/2。