流动相在仪器分析中的作用

1.HPLC对流动相的基本要求

（1）与固定相互为惰性：不与流动相发生化学反应，对系统流路无腐蚀性。

（2）溶解度要求：溶剂对样品有合适的溶解度，使k在1～10（最佳2～5）。

（3）低黏度要求：流动相的黏度会直接影响流动相的流动性能，流动相的黏度小则流动性能好，可在较低柱压下达到需要的流速，溶剂黏度小使柱压低。

（4）与检测器相适应要求：HPLC的检测器以紫外检测器居多，不能选用截止波长大于检测波长的溶剂，即流动相溶剂在测定波长范围内没有吸收。

（5）无固体微粒和溶解气体：流动相溶剂在使用前必须经过专用滤膜过滤处理、超声脱气处理方可使用。样品溶液也要过滤后才能进样，目的是防止色谱柱被堵塞。

2.流动相在分离过程中的作用(www.xing528.com)

在HPLC分离过程中，流动相有两方面的作用。一是对组分的输运作用，携带组分向前移动，一直输送到检测器；二是参与对组分的分配作用，即与固定相形成竞争分配，固定相对组分的溶解使组分滞留，流动相对组分的溶解使组分移行，组分就在滞留与移行的矛盾中达到动态平衡。如果K（或k）大，则组分被固定相保留占优，移行速度就慢，后流出色谱柱；反之，则组分被流动相携带向前移动占优，移行速度就快，先流出色谱柱。

当固定相确定之后，流动相就成为色谱过程中可变与可控的重要条件。通过对分离方程式（7-33）各项分析，有助于了解流动相在分离过程中的作用，流动相是如何影响分离度的。

柱效项　参数是理论塔板数N，主要由色谱柱固定相质量（柱长）决定。

柱选择性项　参数是分离因子α，α值越大，分离度R越大。可以通过改变流动相组成来影响固定相对组分的选择性，从而影响α值的大小。

柱容量项　参数是保留因子k（第二组分），当流动相溶剂的种类确定之后，通过改变种类之间的配比来影响k，当k适当增大时，即固定相对第二组分的保留值增加，移行更加滞后，有利于分离，所以使分离度R增大。

综上所述，在色谱条件一定时，可以通过改变流动相来影响柱效、分离因子、容量因子，从而影响分离度。其中，柱效主要由色谱柱的质量（尺寸）决定；α主要受溶剂种类的影响；在溶剂种类确定之后，k主要受溶剂的配比所支配。所以，选择适当的溶剂种类、合适的配比，以获得较高的N、较大的α和适宜的k，从而提高分离度R。