基因组DNA制备：分子微生物实验指导

1.实验材料

细菌培养物。

2.实验设备

移液管，高速冷冻离心机，台式离心机，水浴锅。

3.实验试剂

（1）CTAB/NaCl溶液 4.1g NaCl溶解于80mL H₂O，缓慢加入10g CTAB，加水至100mL。

（2）其他试剂 氯仿：异戊醇（24∶1），苯酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1），异丙醇，70%乙醇，TE，10%SDS，蛋白酶K（20mg/mL或粉剂），5mol/L NaCl。

4.操作步骤

（1）100mL细菌过夜培养液，5000r/min离心10min，去上清。(www.xing528.com)

（2）加9.5mL TE悬浮沉淀，并加0.5mL 10% SDS，50μL 20mg/mL（或 1mg干粉）蛋白酶K，混匀，37℃保温1h。

（3）加1.5mL 5mol/L NaCl，混匀。

（4）加1.5mL CTAB/NaCl溶液，混匀，65℃保温20min。

（5）用等体积苯酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1）抽提，5000r/min离心10min，将上清移至干净离心管。

（6）用等体积氯仿∶异戊醇（24∶1）抽提，取上清移至干净管中。

（7）加1倍体积异丙醇，颠倒混合，室温下静置10min，沉淀DNA。

（8）用玻璃棒捞出DNA沉淀，70%乙醇漂洗后，吸干，溶解于1mL TE，-20℃保存。如DNA沉淀无法捞出，可5000r/min离心，使DNA沉淀。

（9）如要除去其中的RNA，可以按本章“二、从动物组织提取基因组DNA”中操作步骤处理。