酵母基因组DNA制备实验

操作步骤如下。

（1）划线法在YPD平板上活化酵母菌，28℃培养，2天后长出单菌落。

（2）挑取活化的单菌落接种于5mL YPD培养基中，28℃，180r/min振荡培养8～10h。

（3）移取1.5mL菌液至无菌EP管中，5000r/min离心5min，弃上清。

（4）将菌体悬浮于0.5mL 1mol/L山梨醇，0.1mol/L Na₂EDTA，pH 7.5的缓冲液中。

（5）加入0.02mL 10mg/mL消解酶溶液，37℃保温60～120min。

（6）10000r/min离心 1min，弃上清，菌体重悬于 0.5mL 50mmol/L Tris-HCl，20mmol/L EDTA（pH 7.4）的缓冲液中。(www.xing528.com)

（7）加入0.05mL 10% SDS，混匀，65℃保温30～60min。

（8）加入0.2mL 5mol/L乙酸钾溶液，冰浴60min，12000r/min离心10min。

（9）移取上清至新的EP管中，加入1/10体积的3mol/L乙酸钠（pH 5.2）和2倍体积的无水乙醇，混匀，-20℃过夜沉淀，12000r/min离心10min，将沉淀用70%乙醇洗一次，室温干燥。

（10）将沉淀悬浮于100μL TE（pH 7.4）缓冲液中，加入2μL无DNase的10mg/mL RNase，37℃，保温30min。

（11）提取的基因DNA用双蒸水稀释适当倍数后，在紫外分光光度计上测定OD₂₆₀和OD₂₈₀，计算DNA纯度和浓度。OD₂₆₀/OD₂₈₀值介于1.8～2时，DNA纯度较高。DNA浓度（μg/mL）=OD₂₆₀值×50μg/mL×稀释倍数。DNA样品贮存于-20℃。