斑点杂交实验方法简介

斑点杂交是指将DNA或RNA样品直接点在硝酸纤维素滤膜上，然后与核酸探针分子杂交，以显示样品中是否存在特异的DNA或RNA。同一种样品经不同倍数的稀释，还可以得到半定量的结果。所以它是一种简便、快速、经济的分析DNA或RNA的方法，在基因分析和基因诊断中经常用到，是研究基因表达的有力工具。但由于目的序列未与非目的序列分离，不能了解目的序列的长度。尤其当本底干扰较高时，难以区分目的序列信号和干扰信号。

1.实验材料

待分析的DNA或RNA样品，已标记的探针，硝酸纤维素滤膜，滤纸。

2.实验设备

狭槽点样器，真空泵，恒温水浴，真空烤箱等。

3.实验试剂

100%甲酰胺，37%甲醛，20×SSC，0.1mol/L NaOH等。

4.操作步骤(www.xing528.com)

（1）10μL样品与20μL 100%甲酰胺、7μL 37%甲醛、2μL 20×SSC混合，置于68℃，15min后置冰浴中。

（2）用0.1mol/L NaOH清洗点样器，再用无菌水充分冲洗。将一张经20×SSC浸润的滤纸铺在点样器上，上面再铺上一张经20×SSC浸润1h的硝酸纤维素滤膜，加盖并夹紧，接通真空泵。

（3）用10×SSC清洗各样孔。在每一样品中加两倍体积的2×SSC，混合后加样于孔中。外围几个孔中加2μL染料定位，缓慢抽吸。每孔用1mL 10×SSC清洗两次，继续抽吸5min，吸干滤膜。

（4）取出滤膜，夹在两张滤纸中间，80℃真空烘干2h。按上述Southern杂交或Northern杂交所述的方法与放射性标记探针杂交。

5.注意事项

（1）在放射自显影时应注意滤膜必须干燥，并覆盖上保鲜膜，否则，滤膜将与X光片粘在一起，使以后的操作困难。

（2）在杂交过程中，整个滤膜应一直是湿润的，不得干涸。