p TCK303-sense质粒与TIR 1基因片段分别经过KpnⅠ与Bam HⅠ双酶切，纯化后酶切产物其含量分别为：19 ng/μL与4.7 ng/μL。琼脂糖凝胶电泳显示p TCK303-sense质粒双酶切后条带单一，且对照质粒（p TCK303）条带偏大（见图5-7）。KpnⅠ与Bam HⅠ双酶切后的p TCK303-sense质粒与TIR 1基因片段的连接产物结构如图5-8所示，内含子两侧分别连接TIR 1基因的正向片段与反向片段，同时反向片段会在质粒上引入新的SacⅠ与SpeⅠ两个酶切位点。连接产物转化大肠杆菌筛选单克隆菌株进行载体PCR检测（引物：303s，303a），同时以p TCK303空质粒为对照。PCR检测结果显示p TCK303空质粒扩增出单一条带，其大小近于1 000 bp；而p TCK303-sense-intron-antisense质粒扩增出的主要条带位于1 300 bp左右[见图5-9（a）]。以SacⅠ对p TCK303-sense-intron-antisense质粒和空白质粒进行酶切，酶切后空白质粒（p TCK303）与p TCK303-sense-intronantisense质粒在15 000 bp处都显示出单一明亮的条带，而p TCK303-sense-intron-antisense质粒在850 bp位置具有另一单一条带[见图5-9（b）]，这个850 bp的片段由2个约150 bp的TIR 1基因正、反片段和1个530 bp左右的水稻内含子序列组成（见图5-8）。以上结果说明p TCK303-sense-intron-antisense质粒已插入TIR 1基因正、反两个片段。
图5-7 正向连接片段载体（pTCK303-sense）双酶切（Kpn I，Bam HI）检测
M：DL15 000 DNA Marker 1：p TCK303-sense 2：空白质粒（p TCK303）
(https://www.xing528.com)
图5-8 正、反向连接片段载体（pTCK303-sense-intron-antisense）结构图
图5-9 正、反向连接片段载体（pTCK303-sense-intron-antisense）菌液PCR与双酶切检测
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
