PAM对肝癌细胞的选择性杀伤结果分析

HepG2细胞和L02细胞采用单独培养方式。先用N-APPJ处理不同时间后得到相应的PAM，两种细胞在PAM 中培养24h后对应的结果如图6.3.2所示。图6.3.2（a）所示的是两种细胞分别用N-APPJ处理时间为5 min、10 min、15min的PAM 培养24h后用显微镜拍摄的细胞形态图片，图6.3.2（b）所示的是两种细胞用PAM 培养24h后细胞贴壁率，图6.3.2（c）所示的是在相同处理条件下HepG2细胞与L02细胞贴壁率的比值。

由图6.3.2（a）及图6.3.2（b）可以发现，单独培养时，两种细胞的贴壁率都随着PAM 对应的N-APPJ处理时间的增加而降低，但是HepG2细胞的贴壁率随着PAM 剂量的增加，其下降的速率明显快于L02细胞的贴壁率。例如，对于N-APPJ处理5min的PAM，HepG2细胞的贴壁率要比L02细胞下降得更加明显，L02 细胞贴壁率与对照组细胞相比下降到了95%左右，而HepG2细胞贴壁率下降到了65%左右。这说明PAM 可以选择性地杀伤HepG2细胞。值得注意的是，当采用N-APPJ处理时间为15min的PAM 处理后，两种细胞的贴壁率都下降到了40%以下，这说明高剂量的PAM 在杀死肝癌细胞的同时也会对正常肝细胞产生严重损伤。图6.3.2（c）所示的是两种细胞单独培养时，不同处理条件下HepG2贴壁细胞与L02贴壁细胞的比率，对应0min的（对照组）为1.1；5min的为0.78；10min的为0.65；15min的为0.7。当PAM 的剂量由0min增加至10min时，HepG2与L02贴壁细胞的比率由1.1下降至0.65；当PAM 的剂量由10min增加至15min时，HepG2与L02贴壁细胞的比率由0.65 略微增加至0.7，这提示PAM 选择性杀伤HepG2细胞存在最优剂量。从图6.3.2（b）也能发现，当PAM 的剂量由10 min增加至15min时，HepG2贴壁细胞的下降幅度小于L02贴壁细胞的下降幅度。

图6.3.2　采用单独培养模式时HepG2细胞和L02细胞在用PAM 处理24h后的实验结果[45]

采用分开培养的方式能够准确得到PAM 对两种细胞各自的毒性，而共培养模式考虑了正常细胞和癌细胞之间的相互影响，更加接近真实的肿瘤细胞生存环境，而且实验结果能更加直观地反映PAM 是否对于肝癌细胞具有选择性。

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图6.3.3　两种细胞采用共培养方式，在用PAM 培养24h后的实验结果[45]

（a）中PAM 处理后两种细胞的形态图片，其中，CFSE 荧光染料标记的细胞为HepG2 细胞，HepG2细胞与L02细胞接种比例为1∶3；（b）中HepG2细胞的贴壁率为贴壁HepG2细胞数/对照组HepG2细胞数；（c）中L02细胞贴壁率为贴壁的L02细胞数/整体贴壁细胞数；（d）中HepG2细胞贴壁率为贴壁HepG2细胞数/整体贴壁细胞数，注意与（b）区分

下面将两种细胞采用不同比例（HepG2 细胞：L02 细胞分别为1∶3、1∶1、3∶1）混合后进行共培养，然后用PAM 培养24h 后的实验结果如图6.3.3 所示。其中，图6.3.3（a）是当接种的HepG2细胞和L02细胞的比例为1∶3时，用N-APPJ处理培养基不同时间后得到的对应的PAM，然后用这些PAM 培养两种细胞24h后，用荧光显微镜拍摄得到的细胞形态照片（图中用CFSE染料标记的是HepG2的照片）。图6.3.3（b）和（c）分别是HepG2细胞和L02细胞在两种细胞不同接种比例和用不同剂量的PAM 处理后的细胞贴壁率。图6.3.3（d）是经过PAM 处理24h后贴壁的HepG2细胞与培养孔中两种细胞总体贴壁细胞数的比值。

由图6.3.3（b）和（c）可以发现，当采用共培养方式时，除了HepG2∶L02=1∶1组在剂量为15 min的PAM 的处理情况下，在其他的处理组中，HepG2细胞的贴壁率明显低于正常细胞L02的贴壁率，这说明PAM 杀伤癌细胞的作用比杀伤正常细胞的作用要强，即PAM 具有选择性杀伤癌细胞的作用。进一步由图6.3.3（d）可以发现，当使用N-APPJ 处理时间为10 min 的PAM时，HepG2细胞占整体贴壁的细胞数的比率最低，这说明此时等离子体选择性杀伤癌细胞具有很好的效果。