一、实验目的
（1）了解微生物的淀粉酶扩散实验基本原理。
（2）掌握淀粉水解实验技术。
（3）学会判断水解淀粉的微生物的方法。
二、实验原理
有些微生物具备合成淀粉酶的能力，分泌的胞外淀粉酶可以将细胞外大分子的淀粉水解为糊精、麦芽糖和葡萄糖后进入细胞。淀粉遇碘变为蓝色，但淀粉水解后的产物遇碘不再变为蓝色。利用这一特点，可以判断微生物是否具有水解淀粉能力。
三、实验材料和器材
（1）菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、荧光假单胞菌。
（2）淀粉酶扩散实验培养基：普通牛肉膏蛋白胨培养基加0.2%的可溶性淀粉。
（3）试剂：鲁古氏碘液（碘液配方见附录四）。
（4）实验器材：洁净工作台、酒精灯、平皿、接种环。
四、实验步骤
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图1-50 淀粉水解实验培养基接种示意图
1.枯草杆菌（对照菌）；2～4.受检实验菌
1.制作淀粉培养基平板
将配制好的培养基熔化并冷却到55℃左右后倒入无菌平皿中，冷凝制成平板。
2.无菌接种
用无菌接种环挑取少量的待测菌种点接在培养基表面。每平板可同时接种2～4种不同菌种，其中一种接种枯草杆菌做对照；每个平板点种4～8个菌落为宜（图1-50）。
3.培养受检菌
将2中接种的培养基置于恒温箱，28℃培养24 h。
4.观察菌落周围颜色变化
取出培养基，打开皿盖，滴加少量的鲁古氏碘液于培养基上，轻轻旋转，碘液均匀布满平板。若菌落周围出现一个无色透明圈，说明细菌产生淀粉酶，淀粉酶扩散到培养基中水解了基质中的淀粉，即该菌具有水解淀粉的能力；若菌落周围变为蓝色（无透明圈出现），表明该菌没有分解淀粉的能力，基质中的淀粉遇碘变为蓝色。
五、思考题
试比较分析大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、荧光假单胞菌菌落周围呈现什么颜色？为什么？
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