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离子液体在全血DNA萃取中的应用

时间:2023-11-18 理论教育 版权反馈
【摘要】:根据前述实验结果,采用离子液体对实际样品中的DNA的萃取分离进行了研究,本实验中采用人全血样品。由于蛋白质在血液样品中的含量较大,因此,本文考察了离子液体对血液中主要蛋白质的萃取情况。因此,在处理血液样品时,蛋白质的存在并不影响或干扰DNA的萃取。实验结果表明,血样中的DNA几乎完全被萃取到离子液体中。将萃取到离子液体中的DNA再进行反萃取,约有15%的DNA被反萃取到水溶液中。

离子液体在全血DNA萃取中的应用

根据前述实验结果,采用离子液体对实际样品中的DNA的萃取分离进行了研究,本实验中采用人全血样品。由于蛋白质在血液样品中的含量较大,因此,本文考察了离子液体对血液中主要蛋白质的萃取情况。研究发现,离子液体BmimPF6不能直接萃取白蛋白、血红蛋白、细胞色素C等蛋白质[22-24]。因此,在处理血液样品时,蛋白质的存在并不影响或干扰DNA的萃取。

血液样品中除了蛋白质外,还存在着大量的金属离子及金属配合物,而通常情况下,离子液体不能直接萃取金属离子[25-27],只有通过调节溶液的酸碱性或加入萃取剂或鳌合剂等,才能实现金属离子的萃取,因此血液样品中的主要金属离子对DNA的萃取也没有干扰。(www.xing528.com)

基于以上实验结果,本实验对全血样品中的DNA进行了直接萃取研究。在萃取前,对全血样品进行了初步处理,其操作过程如下:取1.0mL抗凝血放到离心管中,10000r/min条件下离心10min,弃除上层血清,再加入500μL细胞裂解剂(0.01mol/L Tris-HCl,0.1mol/L EDTA,0.5% SDS,pH为8.0)和10μL Proteinase K(20μg/μL)溶液;将此混合物先放至37℃水浴中孵化2h,再放入50℃的水浴中3h。取5.0μL处理后的血液样品稀释到200μL,加入400μL离子液体按实验操作过程进行萃取。实验结果表明,血样中的DNA几乎完全被萃取到离子液体中。将萃取到离子液体中的DNA再进行反萃取,约有15%的DNA被反萃取到水溶液中。

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