高压蒸汽灭菌是应用最广、效果最好的微生物灭菌技术。常用的培养基、水、废弃的培养物及耐高压的药品、纱布、敷料和不适用干热灭菌的物品均可采用高压蒸汽灭菌。
高压蒸汽灭菌是在特定的设备灭菌锅中进行的。通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽，待蒸汽将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，关闭排气阀继续加热。锅内蒸汽随着压力的升高，温度也相应增高(可升到121.6℃)，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的(图Ⅳ－3)。
图Ⅳ－3 高压蒸汽灭菌原理
(选自英文版微生物学教材)
高压蒸汽灭菌器有立式、卧式、手提式等不同类型。它们的结构和灭菌原理基本相同。实验室常用的灭菌器有立式(图Ⅳ－4)和手提式。
1.高压蒸汽灭菌器的基本构造
(1)外锅或称夹套，用于装水产生蒸汽。
图Ⅳ－4 全自动立式高压蒸汽灭菌器
(图片来源于网络)
(2)内锅或称灭菌室，是放置灭菌物的空间，其内可放置铁箅(灭菌金属筐)以分放物品。
(3)压力表，内外锅各装一只，压力表上标明两种单位，即压力单位(MPa)、温度单位(℃)以便于灭菌时参考。
(4)温度计，为感应式仪表温度计，其感应部分安装在锅内的排气管内，仪表安装于锅外部以便于观察。(www.xing528.com)
(5)排气阀，内、外锅各一个，用于排除空气。在灭菌过程中，当超过额定的压力时，排气阀会自动放气减压。安全阀只供超压时安全报警之用，在保温保压时不可使用自动减压装置。
(6)热源，高压蒸汽灭菌器锅底部装有可调电热丝，以电加热，使用较方便。
2.高压蒸汽灭菌器的使用方法与注意事项
(1)加水，手提式与立式高压蒸汽灭菌器，用时必须向灭菌锅内加水，使水面达到内筒底座为止。使用时切勿忘记加水，且加水量不可过少，以防灭菌锅烧干而发生危险。
(2)放入待灭菌物品，将铁箅架(金属筐)放入灭菌锅内，然后把待灭菌物品装入锅内，物品放置不要太紧太满，以利蒸汽流通，盖好锅盖并将固定螺旋拧紧。
(3)加热排气，灭菌锅加热开始后，即可打开排气阀，待锅内水沸腾并有大量蒸汽排出时，维持3～5 min，使锅内冷空气完全逸出后关闭排气阀。亦可在锅内压力升至0.35 kg/cm2或0.025 MPa时打开排气阀，放出锅内冷空气，待冷空气排干净。灭菌时，锅内冷空气必须彻底排出，因为灭菌的主要因素是温度而不是压力。若冷空气未排净，压力表所显示压力并非全部蒸汽压，灭菌将不完全。
(4)保温保压，待灭菌锅压力升至0.1 MPa或1.05 kg/cm2开始计时，维持15～20 min，即可达到灭菌效果。
(5)降压与排气，灭菌完毕，须关闭电源，并待其压力自然下降至“0”时，打开放气阀，开盖取出灭菌物品。打开灭菌锅盖子后，可待15～20 min，借锅中余热将包裹培养皿的纸或棉塞烘干后再将灭菌物品取出。
灭菌结束时，一定要待压力降至“0”时，才能打开排气阀，否则容易发生危险。亦不可突然开大放气阀排气减压，以免因压力骤降，导致瓶内液体沸腾，冲出瓶外，造成以后培养时杂菌污染，甚至灼伤。
(6)灭菌效果检查，将取出的灭菌培养基放于37℃培养箱培养24 h，若无细菌生长，即表示灭菌效果良好。
(7)灭菌锅保养，灭菌结束取出物品后，放出锅内余水，取出锅内杂物，以保证内壁及搁架干燥，防止排水管堵塞。
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