早期诊断和早期治疗是决定肿瘤患者治愈率及预后的一个重要因素,临床中最常用的检查方法是影像学及血清标志物检验,但这些方法很多时候只能在肿瘤发展到一定程度时才能检测出来。越来越多的研究表明,微小RNA可能成为肿瘤早期诊断的生物新靶标,这为肿瘤诊断开拓了一条新思路。大多数微小RNA位于肿瘤相关基因组区域或脆性位点、杂合性丢失区和扩增区,这表明微小RNAs可能在诱发肿瘤形成过程中发挥重要作用。在肿瘤中,微小RNA存在突变、表达上调或下调或表达缺失等情况,微小RNA在肿瘤中的分布和表达模式的不同为早期诊断提供了新的途径。Takamizawa等研究发现肺癌中微小RNA let-7基因表达下调。Johnson等研究显示肺癌组织中let-7的表达较正常肺组织降低50%以上,而在乳腺癌、结肠癌患者组织中只有个别的let-7表达降低。Yanaihara等在对104位肺癌患者和正常肺组织比较研究后发现,43种微小RNA表达存在差异,17种微小RNA在肺腺癌和正常肺组织中的表达有差异,16种微小RNA在肺鳞癌和正常肺组织中的表达有差异,其中miR-21、miR-126、miR-155、miR-191、miR-210、miR-224在肺腺癌、肺鳞癌中都与正常组织不同。而在肺腺癌和肺鳞癌两种病理类型不同非小细胞肺癌之间比较发现,miR-205、miR-99b、miR-203、miR-202、miR-102以及miR-204-prec表达存在差异,其中miR-99b、miR-102在肺腺癌中的表达量较高。对比环境烟草暴露28天后小鼠及非暴露组小鼠肺中126种微小RNA的表达,结果显示let-7、miR-10、miR-26、miR-30、miR-34、miR-122、miR-123、miR-124、miR-125、miR-140、miR-145下降2倍以上;而miR-294表达上升,说明在肺癌发生早期,微小RNA即参与细胞基因调控、信号转化,参与癌前病变的发生,故可以作为早期预测或干预因素进一步研究。Xie等则就痰液标本中异常表达的微小RNA能否作为早期诊断NSCLC的标志物进行了探讨,结果显示肺癌患者的痰液标本中,微小RNA-21表达水平显著升高。ROC曲线分析显示在临床特异性均为100%的前提下,痰液微小RNA-21水平诊断法的灵敏度可达69.66%,明显高于痰细胞学诊断法的47.82%,说明此方法可作为一种有效的无创性检测法。随后,Yu等进一步研究证明痰液中微小RNAs谱变化对肺腺癌具有早期诊断价值。Lebanony等利用基因芯片、qRT-PCR方法检测NSCLC石蜡切片组织中微小RNAs表达谱,比较了不同病理类型的NSCLC样本中微小RNA表达水平,研究结果显示has-miR-205在肺鳞癌中的表达高于非鳞癌的NSCLC,敏感性和特异性均较高,分别达到96%和90%,has-miR-205可作为分类诊断标志物以明确病理类型,协助临床进一步诊治。Raponi等应用交叉验证分析,证实微小RNA-146b在诊断肺鳞癌时显示出很高的精确性。Rabinowits等比较27例肺腺癌患者和9例正常人之间微小RNA的浓度,发现两者之间差异显著,可作为诊断肺腺癌的依据。但由于同一微小RNA可能在多种肿瘤中有相似表达,利用单一微小RNA检测诊断肿瘤可能存在误差,利用多个微小RNA检测可提高肿瘤诊断的正确率。还有相关研究发现微小RNA在良恶性胸腹水中存在差异表达,并且在胸水中更为明显,提示微小RNA有可能在良恶性胸腹水鉴别诊断上发挥参考作用。随着人类对微小RNA的不断深入探索,对于循环微小RNA这一有效、经济的新型诊断工具的研究成为近年来的热点。第一个被发现的血清微小RNA标志物是微小RNA-21。微小RNA在血清中非常稳定,不能被血液中降解其他RNA分子的酶降解,肿瘤的微小RNA能够进入血液循环,血液中的微小RNA量可以在一定程度上反映肿瘤的大小,循环微小RNA可以作为癌症检查的生物新靶标。Mitchell等的检测结果表明血浆室温放置24h,或经过8次冻融,采用qRT-PCR方法检测,内源微小RNA的量没有明显变化,证明血浆中的内源微小RNA分子是稳定的,同时发现血浆和血清中微小RNA的表达谱基本相符。Gilad等也做了类似的4h血浆冻融实验,结果并不影响血清微小RNA作为生物标志物的检测,Chen等发现血清中存在微小RNAs,并且可以经过多次冻融而无明显变化,置于酸性(pH=1)或碱性(pH=13)的溶液3h无明显变化,并通过Solexa测序技术分析了非小细胞肺癌病人的血清微小RNA表达情况,结果发现有28种微小RNA表达缺失而出现63种正常人血清中不存在的微小RNA,并且NSCLC患者血清微小RNA谱与血细胞微小RNA不同。而对于正常的健康者而言,血清和血细胞中微小RNA表达谱是基本相同的。此研究检测了152例肺癌血清和75例健康人血清,差别最大的miR-25和miR-223在肺癌患者血清中高表达得到了验证。以上研究提示我们外周循环的微小RNA具有检测创伤小、稳定性好、高灵敏度等优点,虽然相关研究还处于起步阶段,但可能有望成为肺癌早期诊断的有效手段,并为肿瘤的无创诊断开辟一条新的道路,由于血清或血浆微小RNA的信号过低,无法运用传统的杂交芯片检测。目前检测血清或血浆微小RNA的手段包括高通量的测序法如454测序、solexa测序或者基于定量PCR法的Taqman高通量微列阵,其检测结果都可以通过qRT-PCR验证。随着研究的深入以及检测方法的成熟,血清/血浆微小RNA必将成为检测肿瘤生物标志物的一个很有前途的领域。(www.xing528.com)
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