内容一 温度对酶活性的影响
一、实验目的
（1）了解温度对酶活力的影响作用。
二、实验原理
化学反应速率一般都受温度影响，反应速率随温度的升高而加快，但在酶促反应中，随着温度的升高，酶会因热变性而失活，从而使反应速率减慢，直至酶完全失活。因此在较低的温度范围内，酶促反应速率随温度升高而增大，超过一定温度后，反应速率反而下降，以反应速率对温度作图可得到一条钟形曲线，曲线的顶点对应的温度称为酶作用的最适温度（optimum temperature），此温度对应的酶促反应速率最大。大多数动物酶的最适温度为37～40℃，植物酶的最适温度为50～60℃。
低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。
唾液淀粉酶是动物唾液中含有的一种有催化活性的蛋白质，可以催化淀粉水解为糊精、麦芽糖和葡萄糖。淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色，最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖和葡萄糖遇碘也不呈色。在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度（可反映酶活力的大小）可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。
三、实验材料、仪器与试剂
1.材料
淀粉、唾液。
2.仪器
沸水浴、恒温水浴、冰浴、试管及试管架、量筒、滴管、微量移液器与吸头（或其他替代器具）。
3.试剂
（1）溶于3g/L氯化钠的2g/L淀粉溶液150mL需新鲜配制。
（2）稀释200倍的唾液50mL用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一口蒸馏水，半分钟后使其流入量筒并稀释200倍（稀释倍数可根据个人唾液淀粉酶活性调整），混匀备用。
（3）碘化钾—碘溶液50mL将碘化钾20g及碘10g溶于100mL水中。使用前稀释10倍。
四、实验步骤
（1）实验设计 取3支试管，编号后按表1-12加入试剂。
表1-12 不同温度对唾液淀粉酶活性的影响 单位：mL
（2）实验安排 加入试剂摇匀后，将1、3号两试管放入37℃恒温水浴中，2号管放入冰水中。10min后取出，并将2号管内液体取出一半，加入一个干净的试管，编号为4号管，用碘化钾—碘溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，记录并解释结果。将4号管放入37℃恒温水浴中保温10min后，再用碘化钾—碘溶液进行实验，记录并解释结果。
五、结果与讨论
不同温度对唾液淀粉酶活性的影响结果可填入表1-13。
表1-13 不同温度对唾液淀粉酶活性的影响结果
六、注意事项
（1）加入酶液后，要充分摇匀，保证酶液与全部淀粉液接触反应，得到理想的颜色梯度变化。
（2）取混合液前，应将试管内溶液充分混匀，取出试液后，立即放回试管中一起保温。
思考题
1.唾液淀粉酶的最适温度是多少？
2.低温对酶有什么影响？
3.什么是酶的最适温度及其应用意义？
[1]魏群．基础生物化学实验[M].3版．北京：高等教育出版社，2009.
[2]滕利荣，孟庆繁．生物学基础实验教程[M].3版．北京：科学出版社，2008.
[3]陈钧辉，陶力，李俊，等．生物化学实验[M].3版．北京：科学出版社，2003.
内容二 pH对酶活力的影响
一、实验目的
了解pH对酶活力的影响。
二、实验原理
pH对酶促反应速率的影响作用主要表现在以下几个方面：pH过高或过低可导致酶高级结构的改变，使酶失活；pH的改变可通过影响酶的可解离基团的解离状态来影响酶活性；pH通过影响底物的解离状态以及中间复合物ES的解离状态影响酶促反应速率若其他条件不变，酶只有在一定的pH范围内才能表现催化活性，且在某一pH下，酶促反应速率最大，此pH称为酶的最适pH（optimum pH）。各种酶的最适pH不同，但多数在中性弱酸性或弱碱性范围内，如植物和微生物所含的酶最适pH多为4.5～6.5，动物体内酶最适pH多为6.5～8.0。本实验观察pH对唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶的最适pH约为6.8。
三、实验材料、仪器与试剂
1.材料
淀粉、唾液。
2.仪器
恒温水浴、50mL锥形瓶、滴管、烧杯、试管及试管架、量筒、白瓷调色板、微量移液器与吸头（或其他替代器具）、pH试纸（pH=5、pH=5.8、pH=6.8、pH=8四种）。
3.试剂
（1）溶于3g/L氯化钠的5g/L淀粉溶液250mL需新鲜配制。
（2）稀释200倍的新鲜唾液100mL。
（3）0.2mol/L磷酸氢二钠溶液600mL。
（4）0.1mol/L柠檬酸溶液400mL。
（5）碘化钾—碘溶液50mL。
四、实验步骤
取4个标有号码的50mL锥形瓶，用微量移液器按表1-14添加0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L柠檬酸溶液以制备pH 5.0～8.0的4种缓冲液。
表1-14 不同pH对唾液淀粉酶活性的影响
从3号锥形瓶中取缓冲液3mL，加入一支试管中，添加淀粉溶液2mL，混匀，置于37℃恒温水浴中保温5～10min，再加入稀释200倍的唾液2mL，混匀，仍在37℃恒温水浴中保温。此后每隔1min取出一滴混合液，置于白瓷调色板上，加1小滴碘化钾—碘溶液，检验淀粉的水解程度。待混合液变为棕黄色时，记下酶作用的时间（自加入唾液时开始，准确掌握该时间是实验成败的关键）。
从4个锥形瓶中各取缓冲液3mL，分别加入4支已编号的试管中，随后于每个试管中添加淀粉溶液2mL，置于37℃恒温水浴中保温5～10min，再加入稀释200倍的唾液2mL，混匀，仍在37℃恒温水浴中保温。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔各为1min。根据前期记录的酶作用的时间，向所有试管依次添加1～2滴碘化钾—碘溶液。添加碘化钾—碘溶液的时间间隔，从第1管起均为1min。
观察各试管中物质呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活力的影响作用。
五、结果与讨论
不同pH对唾液淀粉酶活性的影响结果可填入表1-15。
表1-15 不同pH对唾液淀粉酶活性的影响结果
六、注意事项
准确记录酶作用的时间。
思考题
什么是酶反应的最适pH？对酶活性有何影响？
参考文献
[1]魏群．基础生物化学实验[M].3版．北京：高等教育出版社，2009.
[2]滕利荣，孟庆繁．生物学基础实验教程[M].3版．北京：科学出版社，2008.
[3]陈钧辉，陶力，李俊，等．生物化学实验[M].3版．北京：科学出版社，2003.(www.xing528.com)
内容三 唾液淀粉酶的活化和抑制
一、实验目的
了解激活剂与抑制剂对酶活力的影响。
二、实验原理
酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。
三、实验材料、仪器与试剂
1.材料
（1）0.1%淀粉溶液1000mL。
（2）稀释200倍的新鲜唾液 自制。
2.仪器
恒温水浴、试管及试管架。
3.试剂
（1）1%氯化钠溶液500mL。
（2）1%硫酸铜溶液500mL。
（3）1%硫酸钠溶液500mL。
（4）碘化钾—碘溶液500mL。
四、实验步骤
唾液淀粉酶的活化和抑制情况，如表1-16所示。
表1-16 唾液淀粉酶的活化和抑制
五、结果与讨论
记录实验现象，解释实验结果，并说明实验中3号管的意义，填入表1-17。
表1-17 活化剂或抑制剂对酶活性的影响结果
六、注意事项
各人唾液中淀粉酶的活力不同，故本实验需要先做一个唾液淀粉酶稀释度的确定实验，以确定最佳稀释度。
思考题
1.何谓酶的最适pH和最适温度？
2.说明底物浓度、酶浓度、温度和pH对酶反应速度的影响。
3.作为一种生物催化剂，酶有哪些催化特点？
参考文献
[1]魏群．基础生物化学实验[M].3版．北京：高等教育出版社，2009.
[2]滕利荣，孟庆繁．生物学基础实验教程[M].3版．北京：科学出版社，2008.
[3]陈钧辉，陶力，李俊，等．生物化学实验[M].3版．北京：科学出版社，2003.
内容四 酶的专一性
一、实验目的
了解不同的酶的专一性（对底物的选择性）。
二、实验原理
酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。
淀粉和蔗糖无半缩醛基，均无还原性，因此与Benedict试剂无呈色反应。淀粉水解为葡萄糖，蔗糖水解为果糖和葡萄糖，它们都有半缩醛基，为还原糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。
唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉的水解。用Benedict试剂检查糖的还原性。
各种单糖和双糖中的麦芽糖、乳糖和纤维二糖，分子中含有自由醛基或酮基，具还原性，故称还原性糖。它能还原金属离子，如Cu2+、Ag+等，常可用班氏试剂和多伦试剂做鉴定。班氏试剂A液中的硫酸铜溶液与B液中的无水硫酸钠和柠檬酸钠相遇，能产生可溶性的又略能离解出Cu2+的柠檬酸铜。还原性糖在碱性溶液中能将Cu2+还原成Cu+，Cu+再与OH-结合成黄色的CuOH。加热后，CuOH即变成红黄色的氧化亚铜（Cu2O）沉淀，反应式如下：
。
柠檬酸钠可作为Cu2+的络合剂，使之稳定溶解。鉴定反应的实质是Cu2+有弱氧化性，能把葡萄糖氧化成葡萄糖酸：
三、实验材料、仪器与试剂
1.材料
唾液、淀粉。
2.仪器
恒温水浴、沸水浴、试管及试管架。
3.试剂
（1）溶于0.3%氯化钠的1%纤维素溶液500mL。
（2）溶于0.3%氯化钠的1%淀粉溶液（需新鲜配制）500mL。
（3）稀释新鲜唾液100mL。
（4）Benedict试剂1000mL无水硫酸铜17.4g溶于100mL热水中，冷却后稀释至150mL。取柠檬酸钠173g，无水碳酸钠100g和600mL水共热，溶解后冷却并加水至850mL。再将冷却的150mL硫酸铜溶液倾入。本试剂可长久保存。
四、实验步骤
唾液淀粉酶的专一性，如表1-18所示。
表1-18 唾液淀粉酶的专一性
五、结果与讨论
记录实验现象并解释实验结果，填入表1-19。
表1-19 唾液淀粉酶的专一性结果
六、注意事项
严格按照实验操作先后顺序进行。
思考题
1.什么是酶的活化剂？
2.什么是酶的抑制剂？与变性剂有何区别？
3.本实验结果如何证明酶的专一性？
参考文献
[1]王镜岩，朱圣庚，徐长法．生物化学[M].北京：高等教育出版社，2002.
[2]魏群．基础生物化学实验[M].3版．北京：高等教育出版社，2009.
[3]李巧枝，程绎南．生物化学实验技术[M].北京：中国轻工业出版社，2010.
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